ClC-3氯通道蛋白在胃癌中的表达及其调控机制研究

发布时间：2023-04-29 06:06

　　背景胃癌(GC,gastric cancer)是全球最常见的恶性肿瘤之一,发病、死亡的比例逐年增加,这是因为胃癌起病隐袭,易于转移和复发,多数患者发现时已属于中晚期。胃癌的发病机制是一个涉及多基因、多阶段的复杂过程,是宿主遗传因素与环境因素交互作用的结果,其遗传学改变主要包括基因组不稳定、微卫星不稳定、Cp G岛甲基化等。针对胃癌发病过程中的遗传学改变,近年来已发现多种可指导胃癌患者临床预后的潜在靶点,但目前的临床试验发现只有针对HER2和VEGFR2的靶向治疗有效,胃癌的临床预后依然较差,因此深入了解胃癌相关的分子发病机制,在胃癌中找寻有潜在治疗作用的分子靶点,发现和确定新型的肿瘤分子标记对有效治疗胃癌有着极其重要的临床价值。Cl C-3(Chloride Voltage-Gated Channel 3)是近年来备受关注的氯通道蛋白家族成员之一,功能十分复杂,主要负责胞内外离子稳态调节、胞内囊泡的酸化以及细胞膜兴奋性的调节。但近年来研究发现Cl C-3氯通道蛋白与肿瘤的发生发展关系密切,在细胞凋亡、细胞周期、肿瘤耐药等方面起关键作用,但Cl C-3在消化道肿瘤尤其是胃癌中的具体作用机...

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
    一、实验材料
        1、所用细胞系
        2、病理组织样本
        3、实验动物
        4、质粒和菌种
        5、主要试剂
        6、相关抗体
        7、主要试剂盒
        8、引物序列
        9、主要仪器
        10、溶液配制
    二、实验方法
        1、细胞总蛋白及核蛋白的提取
        2、DNA提取
        3、RNA提取
        4、质粒构建及各启动子片段双荧光素酶活性检测
        5、BSBP(Biotin-Streptavidin-Beads Pull-down)蛋白垂钓
        6、快速银染及蛋白质谱鉴定
        7、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)
        8、蛋白免疫印记(Western Blot,WB)
        9、逆转录及实时荧光定量 PCR(Real time q-PCR)
        10、构建稳定沉默/过表达的细胞系
        11、染色质免疫共沉淀(ChIP)
        12、MTS细胞增殖实验
        13、划痕实验
        14、Transwell侵袭实验
        15、克隆形成实验
        16、裸鼠皮下成瘤实验
        17、免疫组织化学(Immunohistochemistry , IHC)
        18、免疫荧光(Immunofluorescence , IF)
    三、统计学方法
    四、技术路线
实验结果
    1、ClC-3在胃癌中的表达及临床意义
        1.1 ClC-3在人胃癌组织中的表达及临床意义
        1.2 ClC-3在人胃癌细胞系中的表达
    2、ClC-3在胃癌中的生物学功能及相关信号通路
        2.1 ClC-3在胃癌中的生物学功能预测及验证
        2.2 ClC-3在胃癌中的相关信号通路预测及验证
    3、ClC-3启动子特异性结合蛋白的垂钓及验证
        3.1 ClC-3启动子双荧光素酶报告基因质粒及启动子探针的构建
        3.2 ClC-3启动子特异性结合蛋白的垂钓及验证
    4、Cl C-3和XRCC5 在人胃癌组织中的表达及临床意义
        4.1 Cl C-3和XRCC5 在人胃癌组织中的表达及相关性
        4.2 Cl C-3和XRCC5 在人胃癌组织中的临床意义
    5、体外实验证明Cl C-3 的表达和功能受XRCC5 调控
        5.1 敲低XRCC5对Cl C-3 表达及胃癌细胞生长迁移的影响
        5.2 过表达XRCC5对Cl C-3 表达及胃癌细胞生长迁移的影响
    6、Cl C-3 表达在转录水平上受XRCC5 调控
    7、Cl C-3 表达调控对下游PI3K/AKT信号通路的影响
    8、ClC-3在胃癌中表达调控的分子机制
        8.1 细胞核中XRCC5特异性结合蛋白的检测
        8.2 XRCC5 特异性结合蛋白PARP1 的验证
        8.3 XRCC5与PARP1 相互作用共同调控Cl C-3 表达
    9、体内实验证明Cl C-3 的表达和功能受XRCC5 调控
讨论及展望
结论
创新点
参考文献
主要缩略词表
综述 ClC-3氯通道蛋白在肿瘤中的作用
    参考文献
附录
博士期间参与的科研项目
博士期间发表的SCI论文
致谢



本文编号：3805321