MCPIP1/SIRT1/NF-κB信号通路对脓毒症介导的脏器损伤及炎症失衡的作用

发布时间：2023-04-30 02:20

　　脓毒症是一种由感染因素引发的全身炎症性疾病,是临床上烧创伤以及感染性疾病常见的并发症。脓毒症进一步发展可导致脓毒症休克和心肾肝肺等多器官功能障碍综合症,最终导致死亡。流行病学调查显示,全球每年有脓毒症患者超过1900万,超过中风、肺癌、乳腺癌、心脏疾病等常见病的发病率。脓毒症不但发病率高,其死亡率也高居不下。调查显示,脓毒症的死亡率超过20%,而脓毒症休克的死亡率更是高达45%。然而脓毒症发病的机制仍未完全阐明,导致脓毒症的治疗未取得根本性突破,因此,对脓毒症发病机制进行研究显得十分迫切。脓毒症的本质是机体失控性炎症反应,炎性细胞被过度激活而造成致炎因子与抗炎因子的平衡失调,从而引起的失控性炎症反应。巨噬细胞的损伤与激活是机体发生失控性炎症反应的核心环节,其分泌的大量炎症因子和其他炎性介质,可引起炎症的级联放大效应,进而导致失控性炎症反应和多脏器功能障碍综合征的发生。巨噬细胞内NF-κB信号通路的持续性激活,是损伤后巨噬细胞分泌过量炎症因子和炎性介质的重要分子基础。正常情况下,NF-κB位于胞浆,与其天然性的抑制因子IκB结合在一起而不能进入核内。当细胞受到内源性或外源性危险因素刺激时...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
    1 脓毒症的研究进展
    2 单核细胞趋化诱导蛋白1(MCP-1 induced protein,MCPIP1)
    3 微小RNA(microRNA,miRNA)
    4 总结
第一部分 脓毒症模型的建立
    1 材料与仪器
        1.1 试验材料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.0 动物模型制作
        2.1 骨髓来源巨噬细胞(BMDM)分离提取
        2.2 细胞模型制作
        2.3 组织标本切片及HE染色
        2.4 血清中IL-1β、IL-6、TNFα含量检测
        2.5 血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)含量的检测
        2.6 qRT-PCR检测相关炎症因子mRNA表达水平
        2.7 数据处理及分析
    3 结果
        3.1 小鼠脓毒症模型的建立
        3.2 体外细胞模型的建立
    4 讨论
第二部分 MCPIP1 对脓毒症炎症反应及脏器损伤的影响
    1 材料与仪器
        1.1 试验材料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 动物模型制作
        2.2 小鼠生存分析
        2.3 细胞模型制作
        2.4 质粒和小干扰RNA(siRNA)
        2.5 细胞转染
        2.6 肝脏标本切片及HE染色
        2.7 血清中IL-1β、TNFα含量检测
        2.8 血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)含量的检测
        2.9 qRT-PCR检测相关炎症因子mRNA表达水平
        2.10 Western Blot检测细胞中MCPIP1及NF-κB信号通路
        2.11 数据处理及分析
    3 结果
        3.1 MCPIP1 在巨噬细胞中的表达
        3.2 MCPIP1 对巨噬细胞中炎症反应的影响
        3.3 MCPIP1 对巨噬细胞中NF-κB p65 核移位的影响
        3.4 MCPIP1 对脓毒症小鼠炎症反应及脏器损伤的影响
    4 讨论
第三部分 MCPIP1 通过调节SIRT1 表达参与炎症调控
    1 材料与仪器
        1.1 试验材料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 细胞模型制作
        2.2 质粒和小干扰RNA(siRNA)
        2.3 细胞转染
        2.4 qRT-PCR检测相关炎症因子mRNA表达水平
        2.5 Western Blot检测细胞中MCPIP1及NF-κB信号通路
        2.6 数据处理及分析
    3 结果
        3.1 MCPIP1 对巨噬细胞中NF-κB p65 乙酰化的影响
        3.2 MCPIP1对SIRT1 表达的影响
        3.3 过表达SIRT1 缓解MCPIP1 介导的炎症反应
    4 讨论
第四部分 MICRORNA-9 参与了MCPIP1 介导的SIRT1 调控
    1 材料与仪器
        1.1 试验材料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 细胞模型制作
        2.2 质粒和小干扰RNA(siRNA)
        2.3 细胞转染
        2.4 qRT-PCR检测相关炎症因子mRNA表达水平及miRNA表达
        2.5 免疫共沉淀试验
        2.6 Western Blot检测细胞中MCPIP1及SIRT1 表达
        2.7 荧光素酶报告基因试验
        2.8 数据处理及分析
    3 结果
        3.1 SIRT1与MCPIP1 之间的相互结合
        3.2 miR-9 通过调控SIRT1 进而调控炎症反应
        3.3 MCPIP1 对巨噬细胞中miR-9 的影响
        3.4 miR-9 参与了MCPIP1 介导的SIRT1 调控
    4 讨论
第五部分 MICRORNA-155 参与了MCPIP1 介导的SIRT1 调控
    1 材料与仪器
        1.1 试验材料
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2 方法
        2.1 细胞模型制作
        2.2 质粒和小干扰RNA(siRNA)
        2.3 细胞转染
        2.4 qRT-PCR检测相关炎症因子mRNA表达水平及miRNA表达
        2.5 Western Blot检测细胞中MCPIP1及SIRT1 表达
        2.6 数据处理及分析
    3 结果
        3.1 MCPIP1 对巨噬细胞中miR-155 的影响
        3.2 miR-155 可调控SIRT1 的表达
        3.3 过表达miR-155 缓解MCPIP1 介导的炎症反应
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3806220