LINC00994在胰腺癌中异常表达及分子机制研究

发布时间：2023-07-24 21:59

　　胰腺癌是高度恶性的消化系统肿瘤,发病率和死亡率逐年上升。2018年全球统计数据显示:胰腺癌发病率2.5%,死亡率4.5%,分别居世界第14位和第7位。胰腺癌发病隐匿,进展迅速,对放化疗均不敏感,诊断时多已属于中晚期,手术切除率仅占20%,且术后复发率、转移率极高,5年生存率仅约8%。因此,现阶段深入探索胰腺癌发生发展的分子机制,寻找有效的治疗靶点尤为重要。2003年4月,人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)的测序工作完成,揭示了人类基因组中只有1%-1.5%的DNA能够编码蛋白,而98%以上的序列属于非编码RNA(non-protein coding RNA,ncRNA),即所谓的“junk DNA”。同年9月,美国国立人类基因组研究院(US National Human Genome Research Institute,NHGRI)启动了继HGP之后又一项跨国基因组学研究项目——DNA原件百科全书(encyclopedia of DNA Elements,ENCODE),旨在解析人类基因组所有的功能元件,该项目用时9年的时间揭示了人类基因组中至少80%...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :胰腺癌组织差异表达长链非编码RNA的筛选
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 组织样本
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 提取RNA
            2.2.2 芯片实验
            2.2.3 数据分析
    3 实验结果
        3.1 RNA及芯片质检结果
        3.2 差异lncRNA筛选统计
        3.3 进一步筛选出长链非编码RNA LINC00994
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第二部分 :长链非编码RNA LINC00994 在胰腺癌中的表达及生物学功能
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 组织样本
            2.1.2 细胞和动物
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 主要引物
        2.2 实验方法
            2.2.1 筛选细胞系
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 细胞和组织总RNA提取
            2.2.4 real-time qPCR检测RNA表达
            2.2.5 CCK-8 检测细胞增殖
            2.2.6 流式细胞术检测细胞周期
            2.2.7 流式细胞术检测细胞凋亡
            2.2.8 划痕实验检测细胞迁移
            2.2.9 Transwell实验检测细胞侵袭
            2.2.10 Western blot检测蛋白表达
            2.2.11 裸鼠成瘤实验
            2.2.12 统计分析
    3 实验结果
        3.1 LINC00994 在胰腺癌组织和细胞中的表达
        3.2 LINC00994 稳定低表达细胞株的构建
        3.3 体外沉默LINC00994 抑制胰腺癌细胞增殖
        3.4 体外沉默LINC00994 使胰腺癌细胞G0/G1 期阻滞
        3.5 体外沉默LINC00994 促进胰腺癌细胞凋亡
        3.6 体外沉默LINC00994 抑制胰腺癌细胞迁移
        3.7 体外沉默LINC00994 抑制胰腺癌细胞侵袭
        3.8 体外沉默LINC00994 抑制裸鼠移植瘤生长
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第三部分 :LINC00994 发挥促癌作用的分子机制
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 组织样本
            2.1.2 细胞和质粒载体
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
            2.1.5 主要引物
        2.2 实验方法
            2.2.1芯片实验
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 细胞和组织总RNA提取
            2.2.4 real-time q PCR检测RNA表达
            2.2.5 Western blot检测蛋白表达
            2.2.6 双荧光素酶报告基因实验
    3 实验结果
        3.1 差异miRNA筛选统计
        3.2 miR-765-3p的筛选及靶基因预测
        3.3 miR-765-3p在胰腺癌组织中的表达及与 LINC00994 的相关性
        3.4 RUNX2 在胰腺癌组织中的表达及与LINC00994 的相关性
        3.5 LINC00994 正向调控RUNX2 的表达
        3.6 RUNX2 正向调控LINC00994 的表达
        3.7 miR-765-3p负向调控LINC00994 和RUNX2 的表达
        3.8 miR-765-3p直接作用于LINC00994 和RUNX2
        3.9 LINC00994 竞争性结合miR-765-3p
        3.10 miR-765-3p逆转LINC00994 对RUNX2 表达的调控
        3.11 miR-765-3p-inhibitor逆转sh-LINC00994 对细胞增殖的抑制
        3.12 miR-765-3p-inhibitor逆转sh-LINC00994 对细胞迁移的抑制
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
本研究创新性的自我评价
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢
个人简历



本文编号：3836603