胰腺癌吉西他滨耐药相关分子的筛选及功能研究

发布时间：2023-09-14 00:25

　　胰腺癌是恶性程度最高的消化道肿瘤之一,发病率和死亡率较高。胰腺癌早期诊断困难、治疗手段有限、预后极差。造成不良预后的一个主要原因是胰腺癌对化疗药物的耐药性。目前以吉西他滨为基础的化疗方案是胰腺癌术后辅助治疗、新辅助治疗和晚期化疗的一线方案,但只有少部分病人能从化疗中获益,胰腺癌对吉西他滨的原发和获得性耐药是影响疗效的主要原因。因此,对胰腺癌吉西他滨耐药的机制进行深入研究有助于我们发现新的治疗靶标,从而提高化疗效果,改善病人预后。吉西他滨发挥功能的主要机制是促进癌细胞的凋亡,而癌细胞凋亡信号途径的失调是导致吉西他滨耐药的重要原因之一。Bcl-XL是胰腺癌中主要的抗凋亡蛋白,但具体调控机制仍不明确。GATA结合蛋白1(GATA1)是最早发现的GATA转录因子家族成员,在胰腺癌中的功能尚未有报道。我们发现,GATA1在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织。高表达GATA1的胰腺癌病人总生存期(OS)和无复发生存期(RF S)较短。GATA 1表达水平可以预测吉西他滨治疗病人的预后,在接受吉西他滨治疗的病人中,高表达GATA1的病人OS和RFS较短,而在未接受西他滨治疗的病人中,GATA1的表达...

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

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缩略词表
中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1、材料
        1.1 细胞株、菌株及实验动物
        1.2 质粒及小RNA
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
        1.5 临床组织样本
        1.6 常用溶液配方
    2. 方法
        2.1 质粒构建
        2.2 细胞培养及转染
        2.3 慢病毒包装及稳转细胞株获取
        2.4 吉西他滨耐药细胞株的获取
        2.5 实时定量PCR
        2.6 蛋白质免疫印迹(Western blot)
        2.7 细胞生长及存活曲线实验
        2.8 平板克隆形成
        2.9 双荧光素酶报告基因实验
        2.10 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验
        2.11 细胞凋亡检测
        2.12 裸鼠成瘤实验
        2.13 免疫组化及免疫荧光
        2.14 TUNEL凋亡检测
        2.15 统计分析
结果
    一、GATA1通过调控抗凋亡通路诱导胰腺癌对吉西他滨耐药
        1.1 GATA1在胰腺癌标本中高表达
        1.2 GATA1表达与胰腺癌病人OS与RFS相关
        1.3 GATA1促进胰腺癌细胞增殖
        1.4 GATA1诱导胰腺癌细胞吉西他滨耐药
        1.5 GATA1诱导胰腺癌耐药的下游基因筛选
        1.6 GATA1通过结合Bcl-XL的启动子调控其转录
        1.7 GATA1通过调控Bcl-XL诱导胰腺癌细胞耐药
        1.8 GATA1在裸鼠体内通过调控Bcl-XL诱导胰腺癌耐药
        1.9 Bcl-XL和GATA1的表达呈正相关
        1.10 Bcl-XL与胰腺癌病人OS与RFS相关
        1.11 GATA1和Bcl-XL表达水平是胰腺癌的独立预后因素
    二、miR-1197通过下调hENT1表达诱导胰腺癌吉西他滨耐药
        2.1 miR-1197在胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中表达水平上调
        2.2 miR-1197诱导胰腺癌细胞吉西他滨耐药
        2.3 miR-1197通过结合hENT1 mRNA的3'UTR序列调控hENT1表达
        2.4 miR-1197通过调控hENT1介导胰腺癌细胞吉西他滨耐药
        2.5 miR-1197在裸鼠体内通过hENT1介导胰腺癌耐药
        2.6 胰腺癌标本中miR-1197与hENT1表达呈负相关
        2.7 miR-1197与吉西他滨化疗组胰腺癌病人预后相关
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢



本文编号：3846192