生肌玉红胶原诱导脂肪干细胞启动miRNA-lncRNA靶向调控P38路径促进血管新生的效应机制研究

发布时间：2024-02-24 14:51

　　研究目的:研究生物支架胶原蛋白结合中医外科治疗慢性创面经典方“生肌玉红膏”调节人源脂肪干细胞(hADSCs)旁分泌促进血管新生的体内外机制。研究内容:提取、分离、培养人来源的脂肪干细胞;制备和评测生肌玉红胶原;根据芯片结果结果和生物信息学分析,筛选生肌玉红原调控脂肪干细胞功能时,差异最大的小分子核糖核酸(microRNA;miRNA)和长链非编码核糖核酸(lncRNA)及他们与预测靶向蛋白p38之间的关系;裸鼠下肢缺血模型实验验证体外实验及部分前期实验所得结果。研究方法:1.胶原蛋白酶消化离心法分离提取人源性脂肪干细胞,诱导成脂、成骨、成软骨多向分化并染色鉴定,流式检测细胞表面抗原鉴定脂肪干细胞;2.用醇提法提取生肌玉红提取液,与胶原蛋白结合后评价其粘附率和对所提脂肪干细胞的增殖影响;3.RT-qPCR验证基因芯片分析的实验组中表达差异最显著的miRNA,慢病毒转染技术沉默该基因,荧光显微镜下观察GFP表达,检测miRNA和p38的表达水平,检验生肌玉红胶原对miRNA和p38表达的逆转作用;4.同筛选miRNA方法筛选基因芯片预测差异lncRNA中差异最显著的lncRNA,检测沉默m...

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－２光镜下细胞形态观察图（放大倍数：１００、２００）??３．２?ｈＡＤＳＣｓ三向诱导分化及鉴定??３．２．１成脂诱导、鉴定??

?第二章人源脂肪干细胞的提娶鉴定及胶原制备???３．实验结果??３．１?ｈＡＤＳＣｓ分离培养??健康患者腹部抽脂术后的脂肪组织颗粒悬液（图１－１）经消化、提纯后，被接种于含??间充质干细胞专用完全培养基（ＭＳＣＭ）的１０ｃｍ培养皿中。光镜下观察，可见培养基中??悬浮着圆形、独立、....

图１－３三向诱导提纯细胞分化实验镜下观察图（放大倍数：１００）??

?南京中医药大学博士学位论文???成脂诱导过程中细胞形态发生明显变化，油红〇染色（图１－３?Ａ）后镜下可见部分细??胞的胞浆中出现橘红色细小脂质颗粒，细胞形态变圆，并且细胞内有多个圆形空泡，是细??胞分化为脂肪细胞的证明。??３．２．２成骨诱导、鉴定??成骨诱导培过程中细胞生长快....

图１－６生肌玉红膏提取液提取流程图??２．２生肌玉红胶原的制备??

?南京中医药大学博士学位论文???２．１生肌玉红膏提取液的制备［２３６］??生肌玉红膏提取液由江苏省中医院制剂部制备，当归６份，甘草６份，白芷６份，??紫草６份，血竭２．４份，诃子６份，黄蜀葵花６份。具体提取方法如下：??①按配方量取当归、甘草、诃子和黄蜀葵花，予８倍重量的７０ｖ....

图１－８与生肌玉红胶原复合生长的ｈＡＤＳＣｓ??

?第二章人源脂肪干细胞的提娶鉴定及胶原制备???３．实验结果??３．１生肌玉红胶原??制备完成的生肌玉红提取液消毒密封于ｌＯＯｍＬ玻璃瓶，室温保存备用。冻干后的胶原??疏松柔软，结合生肌玉红膏提取液后质地稍硬，成品见图１－７。??ｎ?■??＿＿?國＿??（Ａ）?（Ｂ）??图１－７....

本文编号：3909168