微血管内皮细胞影响脱髓鞘疾病发展的机理研究
发布时间：2024-03-23 11:47
脊髓损伤(SCI)和多发性硬化(MS)等脱髓鞘疾病给患者带来不同程度的运动障碍,疾病严重时会造成患者半身不遂和完全瘫痪。然而临床上针对脱髓鞘疾病的治疗非常有限。髓鞘遭到破坏后产生的髓鞘碎片是刺激炎症反应和抑制神经修复造成继发性损伤的重要因素,因此阐明清理髓鞘碎片的细胞分子机制可能会有助于指导脱髓鞘疾病的临床治疗。目前已知骨髓来源的巨噬细胞是在脊髓损伤中心清理髓鞘碎片的主要细胞,但它们被募集到损伤中心发挥作用至少需要一周。是否有其他类型的细胞能在脱髓鞘区域及时清理髓鞘碎片还不得而知。因此,本研究旨在探索参与早期髓鞘碎片吞噬的细胞类型及后续影响,从而明确该新型吞噬髓鞘碎片的细胞在脱髓鞘疾病发展过程的作用和地位。本研究的主要发现如下:1.小鼠SCI和MS脱髓鞘疾病模型显示脱髓鞘区域的微血管内皮富集髓鞘碎片和髓鞘碎片降解产物中性脂质。体外实验发现原代微血管内皮细胞和细胞系以及在基质胶上形成的由原代内皮细胞诱导的类血管结构均能吞噬髓鞘碎片。内皮细胞吞噬髓鞘碎片不依赖于巨噬细胞所需的LRP1,CR3和Mac2受体,但依赖于血清IgG对髓鞘碎片的调理素作用和IgG受体Fc。以上体内外结果表明微血管内...
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
主要缩写词
1 绪论
1.1 问题的提出及意义
1.2 脱髓鞘疾病概述
1.2.1 髓鞘和脱髓鞘疾病的概念
1.2.2 脱髓鞘疾病的诱因和分类
1.2.3 脱髓鞘疾病的临床症状和治疗
1.3 脱髓鞘疾病中几种重要细胞类型的行为
1.3.1 星型胶质细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.3.2 小胶质细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.3.3 骨髓来源的巨噬细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.4 微血管内皮细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.4.1 微血管内皮的特点和功能
1.4.2 微血管内皮在脱髓鞘疾病中的行为
1.5 细胞自噬的概述
1.5.1 细胞自噬的概念
1.5.2 细胞自噬的分子机制
1.5.3 细胞自噬与疾病的关系
1.6 研究内容与研究模式图
1.7 论文的新颖性
2 体内微血管内皮和体外微类血管结构吞噬髓鞘碎片的研究
2.1 引言
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 实验动物和细胞
2.2.2 实验仪器和器皿
2.2.3 实验试剂
2.3 实验方法
2.3.1 构建体内脱髓鞘疾病SCI和 EAE模型用于研究微血管内皮吞噬髓鞘碎片的能力.
2.3.2 构建体外类血管结构用于研究微血管内皮吞噬髓鞘碎片的能力
2.3.3 免疫荧光染色和油红染色
2.3.4 统计分析
2.4 实验结果
2.4.1 在体内小鼠SCI和 EAE模型中微血管内皮吞噬髓鞘碎片并降解成中性脂质
2.4.2 体外生成的类血管结构中微血管内皮吞噬髓鞘碎片
2.5 讨论与小结
3 体外微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片、吞噬效率和机制的研究
3.1 引言
3.2 实验材料与试剂
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验试剂
3.3 实验方法
3.3.1 微血管内皮细胞与髓鞘碎片共培养检测体外吞噬及吞噬效率
3.3.2 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的机制
3.4 实验结果
3.4.1 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的时间依赖性
3.4.2 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片依赖于Ig G的调理素作用
3.5 讨论与小结
4 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的转录组研究
4.1 引言
4.2 实验材料与试剂
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 吞噬髓鞘碎片的血管内皮细胞的RNA测序
4.3.2 实时荧光定量PCR验证RNA测序结果
4.4 实验结果
4.5 讨论和小结
5 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的细胞内降解机制研究
5.1 引言
5.2 材料、仪器与试剂
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在胞内移动和定位
5.3.2 蛋白免疫印迹验证髓鞘碎片激活细胞自噬途径
5.3.3 利用CRISPR-Cas9 技术建立ATG5 敲除的BMECs系[90]
5.3.4 利用油红染色研究细胞自噬对髓鞘碎片的传递作用
5.4 实验结果
5.4.1 髓鞘碎片在细胞内溶酶体中降解
5.4.2 髓鞘碎片在细胞内通过细胞自噬途径到达溶酶体
5.4.3 利用CRISPR-Cas9 技术成功构建Atg5 敲除的细胞系
5.4.4 通过Atg5 敲除的细胞系证明细胞自噬对髓鞘碎片到达溶酶体是必须的
5.5 讨论与小结
6 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之血管新生
6.1 引言
6.2 材料、仪器和试剂
6.2.1 实验材料
6.2.2 实验仪器
6.2.3 实验试剂
6.3 实验方法
6.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在SCI和 EAE疾病模型中对血管新生的影响
6.3.2 免疫荧光和细胞计数检测髓鞘碎片对体外内皮细胞增殖的影响
6.3.3 小鼠皮下移植内皮细胞检测基质胶血管新生
6.3.4 利用Atg5 敲除的细胞系和q-PCR技术研究促血管增殖的机理
6.4 实验结果
6.4.1 髓鞘碎片在SCI和EAE疾病模型中促进血管新生
6.4.2 髓鞘碎片与BMECs共培养促进细胞增殖
6.4.3 小鼠皮下移植和脊髓显微注射吞噬了髓鞘碎片的内皮细胞促进血管新生
6.4.4 髓鞘碎片通过细胞自噬在细胞内传递进而促进VEGF表达促进细胞增殖
6.5 讨论与小结
7 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之炎症反应
7.1 引言
7.2 材料、仪器和试剂
7.2.1 实验材料
7.2.2 实验仪器
7.2.3 实验试剂
7.3 实验方法
7.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在GFP嵌合小鼠SCI和 EAE疾病模型中的炎症反应
7.3.2 细胞显微注射到脊髓研究吞噬髓鞘碎片的内皮细胞的炎症反应
7.3.3 通过BMDMf黏附和蛋白免疫印迹实验检测髓鞘碎片对体外内皮细胞炎症的影响
7.3.4 q-PCR,BMDMf迁移和ELISA检测吞噬髓鞘碎片的内皮细胞上清的炎症因子
7.4 实验结果
7.4.1 髓鞘碎片在GFP嵌合小鼠SCI模型和EAE疾病模型中促进血管炎症反应
7.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞注射到脊髓引起严重的炎症反应
7.4.3 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞炎症粘附因子表达上调促进巨噬细胞的粘附
7.4.4 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞分泌炎症因子到上清液中刺激BMDMf的趋药性
7.5 讨论与小结
8 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之纤维化
8.1 引言
8.2 材料、仪器和试剂
8.2.1 实验材料
8.2.2 实验仪器
8.2.3 实验试剂
8.3 实验方法
8.3.1 免疫荧光检测SCI和 EAE疾病模型中内皮的胶原和纤连蛋白的表达
8.3.2 免疫荧光和蛋白免疫印迹检测吞噬髓鞘碎片内皮细胞胶原和纤连蛋白的表达
8.3.3 基质胶2D胶类血管结构实验检测体外类血管结构胶原蛋白的表达
8.4 实验结果
8.4.1 体内SCI和 EAE疾病模型中内皮的胶原和纤连蛋白的表达明显增加
8.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞胶原和纤连蛋白的表达明显增加
8.5 讨论与小结
9 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之内皮向间充质转化
9.1 引言
9.2 材料、仪器和试剂
9.2.1 实验材料
9.2.2 实验仪器
9.2.3 实验试剂
9.3 实验方法
9.3.1 免疫荧光检测SCI和 EAE疾病模型中内皮的α-SMA蛋白的表达
9.3.2 显微镜白光观察细胞形态变化,免疫荧光检测内皮细胞α-SMA蛋白的表达
9.3.3 q-PCR和蛋白免疫印迹检测内皮细胞α-SMA核酸和蛋白水平的表达
9.4 实验结果
9.4.1 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞形态变化,并且α-SMA的表达明显增加
9.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞α-SMA核酸和蛋白水平的表达明显增加
9.4.3 在SCI和 EAE疾病模型中内皮的α-SMA蛋白的表达明显增加
9.5 讨论与小结
10 结论与展望
10.1 全文的主要结论
10.2 后续工作建议
参考文献
附录
A 作者在攻读博士学位期间发表的论文
B 学位论文数据集
致谢
本文编号：3935872
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中文摘要
英文摘要
主要缩写词
1 绪论
1.1 问题的提出及意义
1.2 脱髓鞘疾病概述
1.2.1 髓鞘和脱髓鞘疾病的概念
1.2.2 脱髓鞘疾病的诱因和分类
1.2.3 脱髓鞘疾病的临床症状和治疗
1.3 脱髓鞘疾病中几种重要细胞类型的行为
1.3.1 星型胶质细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.3.2 小胶质细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.3.3 骨髓来源的巨噬细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.4 微血管内皮细胞在脱髓鞘疾病中的行为
1.4.1 微血管内皮的特点和功能
1.4.2 微血管内皮在脱髓鞘疾病中的行为
1.5 细胞自噬的概述
1.5.1 细胞自噬的概念
1.5.2 细胞自噬的分子机制
1.5.3 细胞自噬与疾病的关系
1.6 研究内容与研究模式图
1.7 论文的新颖性
2 体内微血管内皮和体外微类血管结构吞噬髓鞘碎片的研究
2.1 引言
2.2 实验材料与试剂
2.2.1 实验动物和细胞
2.2.2 实验仪器和器皿
2.2.3 实验试剂
2.3 实验方法
2.3.1 构建体内脱髓鞘疾病SCI和 EAE模型用于研究微血管内皮吞噬髓鞘碎片的能力.
2.3.2 构建体外类血管结构用于研究微血管内皮吞噬髓鞘碎片的能力
2.3.3 免疫荧光染色和油红染色
2.3.4 统计分析
2.4 实验结果
2.4.1 在体内小鼠SCI和 EAE模型中微血管内皮吞噬髓鞘碎片并降解成中性脂质
2.4.2 体外生成的类血管结构中微血管内皮吞噬髓鞘碎片
2.5 讨论与小结
3 体外微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片、吞噬效率和机制的研究
3.1 引言
3.2 实验材料与试剂
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验试剂
3.3 实验方法
3.3.1 微血管内皮细胞与髓鞘碎片共培养检测体外吞噬及吞噬效率
3.3.2 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的机制
3.4 实验结果
3.4.1 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的时间依赖性
3.4.2 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片依赖于Ig G的调理素作用
3.5 讨论与小结
4 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的转录组研究
4.1 引言
4.2 实验材料与试剂
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 吞噬髓鞘碎片的血管内皮细胞的RNA测序
4.3.2 实时荧光定量PCR验证RNA测序结果
4.4 实验结果
4.5 讨论和小结
5 微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的细胞内降解机制研究
5.1 引言
5.2 材料、仪器与试剂
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在胞内移动和定位
5.3.2 蛋白免疫印迹验证髓鞘碎片激活细胞自噬途径
5.3.3 利用CRISPR-Cas9 技术建立ATG5 敲除的BMECs系[90]
5.3.4 利用油红染色研究细胞自噬对髓鞘碎片的传递作用
5.4 实验结果
5.4.1 髓鞘碎片在细胞内溶酶体中降解
5.4.2 髓鞘碎片在细胞内通过细胞自噬途径到达溶酶体
5.4.3 利用CRISPR-Cas9 技术成功构建Atg5 敲除的细胞系
5.4.4 通过Atg5 敲除的细胞系证明细胞自噬对髓鞘碎片到达溶酶体是必须的
5.5 讨论与小结
6 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之血管新生
6.1 引言
6.2 材料、仪器和试剂
6.2.1 实验材料
6.2.2 实验仪器
6.2.3 实验试剂
6.3 实验方法
6.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在SCI和 EAE疾病模型中对血管新生的影响
6.3.2 免疫荧光和细胞计数检测髓鞘碎片对体外内皮细胞增殖的影响
6.3.3 小鼠皮下移植内皮细胞检测基质胶血管新生
6.3.4 利用Atg5 敲除的细胞系和q-PCR技术研究促血管增殖的机理
6.4 实验结果
6.4.1 髓鞘碎片在SCI和EAE疾病模型中促进血管新生
6.4.2 髓鞘碎片与BMECs共培养促进细胞增殖
6.4.3 小鼠皮下移植和脊髓显微注射吞噬了髓鞘碎片的内皮细胞促进血管新生
6.4.4 髓鞘碎片通过细胞自噬在细胞内传递进而促进VEGF表达促进细胞增殖
6.5 讨论与小结
7 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之炎症反应
7.1 引言
7.2 材料、仪器和试剂
7.2.1 实验材料
7.2.2 实验仪器
7.2.3 实验试剂
7.3 实验方法
7.3.1 免疫荧光检测髓鞘碎片在GFP嵌合小鼠SCI和 EAE疾病模型中的炎症反应
7.3.2 细胞显微注射到脊髓研究吞噬髓鞘碎片的内皮细胞的炎症反应
7.3.3 通过BMDMf黏附和蛋白免疫印迹实验检测髓鞘碎片对体外内皮细胞炎症的影响
7.3.4 q-PCR,BMDMf迁移和ELISA检测吞噬髓鞘碎片的内皮细胞上清的炎症因子
7.4 实验结果
7.4.1 髓鞘碎片在GFP嵌合小鼠SCI模型和EAE疾病模型中促进血管炎症反应
7.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞注射到脊髓引起严重的炎症反应
7.4.3 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞炎症粘附因子表达上调促进巨噬细胞的粘附
7.4.4 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞分泌炎症因子到上清液中刺激BMDMf的趋药性
7.5 讨论与小结
8 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之纤维化
8.1 引言
8.2 材料、仪器和试剂
8.2.1 实验材料
8.2.2 实验仪器
8.2.3 实验试剂
8.3 实验方法
8.3.1 免疫荧光检测SCI和 EAE疾病模型中内皮的胶原和纤连蛋白的表达
8.3.2 免疫荧光和蛋白免疫印迹检测吞噬髓鞘碎片内皮细胞胶原和纤连蛋白的表达
8.3.3 基质胶2D胶类血管结构实验检测体外类血管结构胶原蛋白的表达
8.4 实验结果
8.4.1 体内SCI和 EAE疾病模型中内皮的胶原和纤连蛋白的表达明显增加
8.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞胶原和纤连蛋白的表达明显增加
8.5 讨论与小结
9 微血管内皮吞噬髓鞘碎片的功能变化之内皮向间充质转化
9.1 引言
9.2 材料、仪器和试剂
9.2.1 实验材料
9.2.2 实验仪器
9.2.3 实验试剂
9.3 实验方法
9.3.1 免疫荧光检测SCI和 EAE疾病模型中内皮的α-SMA蛋白的表达
9.3.2 显微镜白光观察细胞形态变化,免疫荧光检测内皮细胞α-SMA蛋白的表达
9.3.3 q-PCR和蛋白免疫印迹检测内皮细胞α-SMA核酸和蛋白水平的表达
9.4 实验结果
9.4.1 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞形态变化,并且α-SMA的表达明显增加
9.4.2 吞噬髓鞘碎片的内皮细胞α-SMA核酸和蛋白水平的表达明显增加
9.4.3 在SCI和 EAE疾病模型中内皮的α-SMA蛋白的表达明显增加
9.5 讨论与小结
10 结论与展望
10.1 全文的主要结论
10.2 后续工作建议
参考文献
附录
A 作者在攻读博士学位期间发表的论文
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