Beclin-1对子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞孕酮合成的影响及其作用机制

发布时间：2024-11-03 22:39

　　研究背景及目的卵巢功能异常是导致子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者妊娠结局不佳的重要原因之一。EMS不孕患者卵泡液中孕酮(progesterone,P4)水平改变可引起卵泡发育障碍、卵母细胞质量下降从而影响胚胎发育潜能。既往研究发现参与自噬调控的重要基因Beclin-1(BECN1)与EMS的发生发展之间存在密切的联系,但BECN1在EMS卵巢颗粒细胞中的表达及其对卵巢功能的影响目前尚不明确。因此,本研究旨在探讨BECN1对EMS不孕患者卵巢颗粒细胞孕酮合成的调控及其作用机制。研究方法1.选取26例腹腔镜诊断EMS的不孕患者和29例单纯输卵管因素不孕的对照组患者纳入研究,收集穿刺取卵抽吸出的卵泡液。2.通过临床数据统计分析,比较两组患者的基本资料以及优胚率。3.自卵泡液中分离纯化颗粒细胞,采用蛋白质印迹分析、电子显微镜、免疫荧光以及实时荧光定量PCR检测两组患者颗粒细胞中BECN1的表达及自噬水平。4.通过电化学发光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)技术检测两组患者卵泡液中的孕酮浓度;采用蛋白质印迹分析和...

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
中文部分
    绪论
    第一部分 自噬相关基因Beclin-1 在子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞中的表达
        1.1 引言
        1.2 材料与方法
            1.2.1 主要试验仪器
            1.2.2 主要试剂和溶液
            1.2.3 研究对象
            1.2.4 卵泡液的收集和卵巢颗粒细胞的提取
            1.2.5 蛋白质印迹分析
            1.2.6 电子显微镜
            1.2.7 免疫荧光实验
            1.2.8 总RNA提取和反转录
            1.2.9 实时荧光定量PCR实验
            1.2.10 血清类固醇激素的检测
            1.2.11 胚胎级别评定方法及优胚率计算
            1.2.12 统计学分析
        1.3 结果
            1.3.1 纳入研究对象的一般情况与临床结局
            1.3.2 EMS组和对照组卵巢颗粒细胞中自噬相关蛋白的表达水平
            1.3.3 EMS组和对照组卵巢颗粒细胞中自噬溶酶体的数量
            1.3.4 EMS组和对照组卵巢颗粒细胞中LC3 的点状聚集
            1.3.5 EMS组和对照组卵巢颗粒细胞中自噬相关基因的mRNA表达水平
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二部分 Beclin-1 在子宫内膜异位症患者卵巢颗粒细胞孕酮合成中的作用及机制研究
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
            2.2.1 主要试验仪器
            2.2.2 主要试剂和溶液
            2.2.3 研究对象
            2.2.4 卵泡液的收集和卵巢颗粒细胞的提取
            2.2.5 卵泡液和细胞培养上清液孕酮测定
            2.2.6 卵巢颗粒细胞的培养和处理
            2.2.7 总蛋白提取和蛋白质印迹分析
            2.2.8 总RNA提取和反转录以及实时荧光定量PCR实验
            2.2.9 siRNA干扰实验
            2.2.10 细胞活性检测
            2.2.11 胆固醇检测实验
            2.2.12 慢病毒感染实验
            2.2.13 质粒转染实验
            2.2.14 统计学分析
        2.3 结果
            2.3.1 EMS组和对照组卵泡液中的孕酮水平和颗粒细胞孕酮合成关键酶的表达情况
            2.3.2 BECN1 敲低对卵巢颗粒细胞孕酮合成的影响
            2.3.3 卵巢颗粒细胞中LDL诱导的孕酮合成及其关键酶的表达
            2.3.4 BECN1在LDL诱导卵巢颗粒细胞孕酮合成中的调控作用
            2.3.5 BECN1 过表达对卵巢颗粒细胞孕酮合成的影响
            2.3.6 BECN1与STAR mRNA和获卵数相关性
        2.4 讨论
        2.5 小结
    全文总结
    参考文献
英文部分
    Introduction
    Part Ⅰ Expression of Autophagy-related Gene Beclin-1 in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        1.1 Introduction
        1.2 Materials and methods
        1.3 Results
        1.4 Discussion
        1.5 Summary
    Part Ⅱ The Roles and Mechanisms of Beclin-1 in Progesterone Synthesis in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        2.1 Introduction
        2.2 Materials and methods
        2.3 Results
        2.4 Discussion
        2.5 Summary
    Conclusions
    References
致谢
攻读博士学位期间发表(录用)的学术论文
八年制学位论文要求



本文编号：4011458