USP47与SMURF2介导的SATB1泛素化调控结肠癌发生发展的分子机制研究

发布时间：2024-12-27 05:43

　　结直肠癌是全世界范围内常见的消化道肿瘤,在恶性肿瘤中排第三位,是癌症死亡的一大主要原因。随着人们饮食生活水平的提高,结直肠癌的发病率和死亡率逐年增加。特别是在我国肿瘤患者中,男性和女性的结直肠癌发病率分别居于第四位和第五位。近年来,尽管手术切除、放疗和化疗在调节各种局部肿瘤方面取得了进展,但结直肠癌的复发和肿瘤转移的出现仍是治疗失败的主要原因。因此,阐明结直肠癌发生和转移的潜在分子机制就显得至关重要。特异性AT富集序列结合蛋白1基因位于染色体3p23上,全长763个氨基酸。SATB1的表达具有组织特异性。研究证明SATB1在结肠癌和乳腺癌等癌症中高表达并发挥重要作用。SATB1在乳腺癌中能同时改变上千个基因的表达,上调促癌基因,下调抑癌基因,促进癌细胞的生长和转移。SATB1参与基因表达的负调控,SATB1与MAR结合形成网架结构的复合体,锚定于其环基底部,参与染色体重塑和组蛋白去泛素化酶的“着陆”,进而调控基因表达。SATB1参与T细胞发育,协调T细胞发育各个阶段的基因正常有序的表达,SATB1通过组蛋白去泛素化酶等改变某些结构域的结构,影响转录因子进入染色体,影响T细胞发育相关基因的...

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图2.1 DUB文库免疫共沉淀显示USP47与SATB1存在相互作用。将DUB文库相关质粒分别与SATB1质粒共转染293T细胞,用对应的抗体进行免疫共沉淀后,再免疫印迹检测DUB文库质粒与SATB1质粒相互作用情况。

从大约60个DUB中,通过免疫共沉淀分析蛋白质-蛋白质互作,结果显示(图2.1):在DUB文库中,SATB1蛋白与去泛素化酶USP47存在相互作用。图2.1DUB文库免疫共沉淀显示USP47与SATB1存在相互作用。将DUB文库相关质粒分别与SATB1质粒共转染293T细胞,用....

图2.1 DUB文库免疫共沉淀显示USP47与SATB1存在相互作用。将DUB文库相关质粒分别与SATB1质粒共转染293T细胞,用对应的抗体进行免疫共沉淀后,再免疫印迹检测DUB文库质粒与SATB1质粒相互作用情况。

图2.1DUB文库免疫共沉淀显示USP47与SATB1存在相互作用。将DUB文库相关质粒分别与SATB1质粒共转染293T细胞,用对应的抗体进行免疫共沉淀后,再免疫印迹检测DUB文库质粒与SATB1质粒相互作用情况。2.4.2USP47与SATB1存在相互作用

图2.2 USP47和SATB1特异性相互作用:(A)在293T细胞中外转质粒,验证USP47与SATB1的外源性相互作用。Flag-SATB1表达质粒单独或与myc-USP47共转染到HEK293T细胞中,用抗myc抗体免疫沉淀SATB1蛋白;Flag-USP47表达质粒单独或与myc-SATB1共转染到HEK293T细胞中,用抗myc抗体免疫沉淀USP47蛋白。并在全细胞裂解液中验证SATB1和USP47的表达。(B)在HCT116细胞中,验证USP47与SATB1的内源性相互作用。正常兔IgG(r IgG)用作对照。

为进一步确定SATB1与USP47之间的相互关系,我们首先在293T细胞中转染质粒,通过免疫共沉淀方法分析USP47与SATB1蛋白互作情况,结果显示:通过USP47可以共沉淀SATB1,同样通过SATB1也可以共沉淀USP47(图2.2A)。此外,在结肠癌细胞HCT116中,用....

图2.3 USP47及其突变体示意图:USP47含有一个氮末端C19C功能结构域,中间卷曲结构域和一个羧基端。

去泛素化酶USP47包含有氨基端C19C功能结构域,中间卷曲结构域和羧基端结构域。为了分析USP47结构域中与SATB1相互作用的区段,我们设计构建了USP47的截短突变体(图2.3)。免疫共沉淀结果显示:SATB1与全长USP47、氨基端含C19C结构域的截短突变体相互作用,而....

本文编号：4021221