MiR-299-3P在甲状腺乳头状癌中的表达及作用

发布时间：2025-03-30 00:12

　　研究背景和意义甲状腺癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,过去的几十年中,甲状腺癌的发病率在世界范围内都呈现明显上升的趋势。在我国,2015年甲状腺癌的发病率达到女性恶性肿瘤发病率的第四位,占女性恶性肿瘤的8.49%。临床工作中常见的甲状腺癌病理类型有四种:乳头状癌、髓样癌、滤泡状癌以及未分化癌。其中乳头状癌是最为常见的病理类型,约占全部甲状腺癌的88%。有研究认为甲状腺乳头状癌发病率的上升导致了甲状腺癌发病率的整体上升。手术治疗为甲状腺乳头状癌的主要治疗手段之一,手术治疗效果良好。据报道,甲状腺乳头状癌术后20年生存率可达99%。尽管甲状腺乳头状癌术后生存率很高,但长期随访结果显示,其复发率高达25%。甲状腺乳头状癌不但给患者带来了手术治疗的身体的创伤,同时也因对疾病复发恐惧,带来了沉重的心理负担。因此,进行相关的基础研究,阐明甲状腺乳头状癌的发生、发展的分子机制具有重要的价值。MicroRNA(miRNA)是一类非编码单链小RNA分子,一般是由内源基因编码的,长度约为19-25个核苷酸。MiRNA可以通过识别靶基因转录后的目的mRNA的3'端非编码区域(3'untranslated regi...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略语说明
前言
第一部分 MiR-299-3P在甲状腺乳头状癌中的表达
    材料和方法
        一、材料与试剂
            1、组织标本来源
            2、细胞系来源
            3、主要试剂
        二、主要实验仪器
        三、实验方法
            1、细胞培养
            2、甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织总RNA提取
            3、细胞总RNA的提取
            4、逆转录合成cDNA
            5、实时荧光定量PCR的实施
        四、统计学方法
    结果
        1、组织总RNA及细胞总RNA的抽提结果
        2、MiR-299-3P在甲状腺乳头状癌中低表达
        3、MiR-299-3P在不同甲状腺癌细胞系中的表达
    讨论
第二部分 MiR-299-3P对甲状腺乳头状癌细胞功能的影响
    材料和方法
        一、材料与试剂
            1、细胞系
            2、主要试剂
        二、主要实验仪器
        三、实验方法
            1、MiR-299-3P mimics、inhibitor及其阴性对照的转染
            2、实时荧光定量PCR
            3、CCK-8法绘制细胞增殖曲线
            4、Edu增殖检测
            5、细胞周期的检测
            6、流式细胞仪检测细胞凋亡(Annexin V/PI双染色法)
        四、统计学方法
    结果
        1、甲状腺乳头状癌细胞miR-299-3P表达的上调和抑制
        2、MiR-299-3p表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响
        3、MiR-299-3p表达对甲状腺乳头状癌细胞周期分布的影响
        4、MiR-299-3p表达对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的影响
    讨论
第三部分 MiR-299-3p在动物体内的作用研究
    材料和方法
        一、材料
        二、实验方法
        三、统计学方法
    结果
        1、移植瘤miR-299-3p表达的检测
        2、MiR-299-3p的过表达抑制了移植瘤的生长
    讨论
第四部分 MiR-299-3p靶基因的预测及验证
    材料及方法
        一、材料与试剂
        二、主要仪器
        三、实验方法
            1、MiR-299-3p候选靶基因的筛选和验证
            2、甲状腺癌手术标本SHOC2 mRNA水平的检测
            3、SHOC2过表达pcDNA 3.1质粒的构建
            4、Western blot实验
            5、其它
    结果
        1、MiR-299-3p靶基因的筛选
        2、利用双荧光素酶报告系统证实SHOC2是miR-299-3p直接作用的靶基因
        3、在甲状腺乳头状癌中SHOC2表达与miR-299-3p表达的关系
        4、Rescue assay
    讨论
结论
意义
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况表
英文论文Ⅰ
英文论文Ⅱ



本文编号：4037879