叶酸受体α介导ERK信号通路对宫颈癌变的作用及其机制研究

发布时间：2017-06-12 19:10

  本文关键词：叶酸受体α介导ERK信号通路对宫颈癌变的作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宫颈癌是女性常见妇科恶性肿瘤之一,已经成为严重危害女性身心健康和生命安全的公共卫生问题。高危型HPV持续感染是宫颈癌发生的主要原因,但不是唯一病因。叶酸受体α(FRα)在宫颈癌细胞中高表达,与宫颈癌的发生演变密切相关,然而,FRα在宫颈癌变过程中的作用及机制不明。本研究从人群研究和体外细胞实验研究两个层面展开,评价FRα在宫颈病变中的作用及可能的分子生物学机制,为宫颈癌病因研究和防治提供科学依据。目的:目的:将人群研究和体外实验研究相结合,评价FRα在宫颈癌变过程中的作用,探讨FRα介导ERK信号通路在宫颈癌变中的可能机制,为宫颈癌的病因和发病机制研究提供理论依据,为宫颈癌的预防和治疗开拓新思路。方法:方法:人群研究:在获得山西医科大学伦理审查委员会批准的基础上,遵循知情同意的原则,选取山西省肿瘤医院、山西省妇幼保健院、山西省晋煤集团总医院就诊的正常宫颈者(NC)34例、低度宫颈上皮内瘤样变者(CINⅠ)26例、中高度宫颈上皮内瘤样变者(CINⅡ/CINⅢ)57例、宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者59例为研究对象。采用自行设计的结构式问卷调查研究对象的人口学特征、个人卫生生活习惯和生殖情况等。同时采集宫颈手术或活检组织标本,应用免疫组化法检测宫颈组织中FRα、p-Src、p-ERK1/2、p-c-Fos和p-c-Jun蛋白表达水平,并应用PCR技术检测宫颈组织中HPVs感染情况。体外实验研究:采用流式细胞术对宫颈癌Hela、Caski、Siha和C33A细胞进行FRα蛋白阳性细胞筛选,确定FRα蛋白强阳性的Hela细胞和弱阳性C33A细胞进行后续研究。采用FRαsi RNA干扰技术下调Hela细胞的FRα蛋白表达水平,并对Hela和C33A细胞进行Src和ERK抑制。对FRα干扰组和未干扰组、Src抑制组和未抑制组、ERK抑制组和未抑制组分别采用CCK-8法测定细胞活性;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Real-time PCR技术检测FRα、Src、ERK1、ERK2、c-Fos和c-Jun的m RNA表达水平;Western-blot技术检测上述指标的蛋白及磷酸化蛋白表达水平。采用Epidata3.0建立数据库,并应用SPSS17.0统计软件进行统计分析。单因素分析采用χ2检验、趋势χ2检验、t检验、方差分析、重复测量方差分析,均数的两两比较采用LSD-t检验;多因素分析采用多元logistic回归分析法。结果:结果:1.宫颈癌相关因素分析显示,45岁以上(χ2=25.308,P=0.003)、初中以下文化程度(χ2=11.854,P=0.008)、居住地为农村(χ2=19.141,P0.001)、洗澡频率低(χ2=17.067,P=0.009)、洗阴频率低(χ2=17.238,P=0.008)、月经初潮年龄≥14岁(χ2=8.930,P=0.030)、首次性交年龄18岁(χ2=9.284,P=0.026)、有妇科病史(χ2=13.988,P=0.003)、产次大于4次(χ2=15.187,P=0.019)、HPVs感染(χ2=19.44,P=0.001)是宫颈癌变的危险因素。2.随着宫颈病变程度加重,FRα蛋白强阳性表达率(χ2=8.848,P=0.031;χ2趋势=4.965,P=0.026)和p-c-Jun蛋白强阳性表达率(χ2=15.719,P=0.001;χ2趋势=13.253,P0.001)、p-Src(χ2=12.62,P=0.006;χ2趋势=9.49,P=0.002)和p-ERK1/2(χ2=11.00,P=0.012;χ2趋势=10.58,P=0.001)及p-c-Fos(χ2=13.62,P=0.003;χ2趋势=10.39,P=0.001)蛋白阳性表达率均呈线性增加趋势。3.下调FRα后,Hela细胞增殖能力下降,G0/G1期细胞比例增高,S期、G2/M期细胞比例和增殖指数下降,细胞早期凋亡率增加(F=261.972,P0.001);抑制Src和ERK后,Hela和C33A细胞均显示增殖能力下降,G0/G1期细胞比例增高,S期、G2/M期细胞比例和增殖指数下降,细胞早期凋亡率增加(Hela:t=11.498,P=0.007;C33A:t=53.501,P=0.001);抑制Src和ERK后,Hela与C33A细胞相比,细胞增殖能力和细胞周期变化无统计学差异(P0.05);抑制Src后,对C33A细胞凋亡的促进作用强于Hela细胞,差别具有统计学意义(t=31.631,P0.001);抑制ERK后,对C33A细胞凋亡的促进作用强于Hela细胞,但差别无统计学意义(t=0.724,P=0.496)。4.下调FRα后,Src、ERK1、ERK2和c-Jun的m RNA表达水平均增高(P0.05),p-ERK1/2、c-Fos、p-c-Fos、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平降低(P0.05),p-Src蛋白表达水平增加(P0.05);抑制Src后,ERK1、ERK2、c-Fos和c-Jun m RNA表达水平增加(P0.05),ERK、p-ERK、p-c-Fos蛋白表达水平降低(P0.05)、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达水平增加(P0.05);抑制ERK后,Hela细胞c-Fos和c-Jun m RNA表达水平增加(P0.05),Hela和C33A细胞的p-c-Fos蛋白表达水平降低(P0.05)、p-c-Jun蛋白表达水平增高(P0.05)。5.多元logistic回归分析结果显示,以正常宫颈组为对照,洗澡频率1次/周(OR=0.026)是CINⅠ的保护因素,妇科病史(OR=8.904)、FRα高表达(OR=6.599)是CINⅠ的危险因素;洗澡频率1次/周(OR=0.088)是CINⅡ/Ⅲ的保护因素,HPVs感染(OR=5.588)是CINⅡ/Ⅲ的危险因素;HPVs感染(OR=12.894)、FRα高表达(OR=8.210)、居住地为农村(OR=6.387)、Src活化(OR=5.236)、c-Jun活化(OR=4.281)是宫颈癌的主要危险因素。结论:结论:1.FRα高表达、Src、ERK1/2、c-Fos和c-Jun蛋白活化可促进宫颈癌变的发生和进展。FRα、Src和ERK1/2高表达可促进宫颈癌细胞增殖、抑制凋亡、促进细胞周期向G2/M期转变。2.FRα可通过上调ERK信号通路的关键调节因子ERK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白表达促进宫颈癌变进展。Src活化可通过上调ERK1/2、c-Fos蛋白表达促进宫颈癌变过程。ERK磷酸化可通过上调c-Fos蛋白表达起促进宫颈癌变的作用。FRα可激活ERK信号通路关键因子的表达,促进宫颈癌变进展,提示FRα可作为宫颈癌预防和治疗的新靶点。3.下调FRα后,Src蛋白表达增加;抑制Src和ERK后,c-Jun蛋白表达增加,可能与FRα激活的ERK信号通路中有其他信号因子存在有关,也可能与存在负反馈机制有关,详细机制有待进一步探讨。4.多因素分析提示,HPVs感染、FRα高表达、居住地为农村、Src和c-Jun的活化、妇科病史为宫颈癌和癌前病变的主要危险因素,勤洗澡是宫颈癌前病变的保护因素。
【关键词】：叶酸受体α Src ERK1/2 c-Fos c-Jun 信号通路 宫颈癌变 机制
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 常用缩写词中英文对照表14-15
• 前言15-19
• 1 材料与方法19-38
• 第一部分 人群研究19-24
• 1.1 研究对象19
• 1.2 资料和标本收集19-20
• 1.3 主要仪器及试剂20-22
• 1.4 实验方法22-24
• 第二部分 体外实验研究24-38
• 1.5 实验细胞24-25
• 1.6 实验材料25-30
• 1.7 实验方法30-35
• 1.8 质量控制35-36
• 1.9 数据录入与统计分析36-38
• 2 结果38-86
• 第一部分 人群研究38-51
• 2.1 人群研究对象一般情况及宫颈癌相关因素38-40
• 2.2 不同程度宫颈病变组FRα 蛋白表达比较40-43
• 2.3 不同程度宫颈病变组ERK信号通路关键因子蛋白表达情况比较43-50
• 2.4 宫颈癌变相关因素多元logistic回归分析50-51
• 第二部分 体外细胞实验51-86
• 2.5 FRα 对宫颈癌细胞的作用及机制51-64
• 2.6 Src对宫颈癌细胞的作用及机制64-75
• 2.7 ERK对宫颈癌细胞的作用及机制75-86
• 3 讨论86-96
• 3.1 宫颈癌变相关因素86
• 3.2 FRα 在宫颈癌变过程中的作用及机制86-90
• 3.3 Src在宫颈癌变过程中的作用及机制90-92
• 3.4 ERK信号通路在宫颈癌变过程中的作用及机制92-96
• 结论96-97
• 创新点与不足之处97-98
• 参考文献98-109
• 综述109-125
• 参考文献118-125
• 致谢125-126
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果126-128
• 个人简介128

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 丁玲;马景丽;周芩;王金桃;;叶酸对人宫颈癌细胞增殖抑制的作用及其与HPV16相互关系的研究[J];卫生研究;2013年05期

  本文关键词：叶酸受体α介导ERK信号通路对宫颈癌变的作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：444760