高强度运动训练对专业运动员免疫功能的影响及葫芦素E潜在免疫调节作用研究

发布时间：2017-07-26 19:11

  本文关键词：高强度运动训练对专业运动员免疫功能的影响及葫芦素E潜在免疫调节作用研究

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【摘要】：目的:首先通过对我省专业运动员大规模普查,建立我省专业运动员常规免疫指标参考范围,为合理评估运动员训练效果和恢复状态提供依据;然后调查四周高强度训练对专业运动员免疫功能的影响,探讨高强度训练对运动员免疫的抑制作用;继而研究葫芦素E(Cuc E)的免疫调节作用及其机制,探讨Cuc E作为运动员免疫调节药物的潜在可能性。方法:(1)采集广东省棒球队、垒球队、篮球队、曲棍球队、手球队和足球队专业运动队员共603例样品,检测白细胞分类和血清免疫球蛋白水平,用SPSS软件计算95%参考区间建立运动员常规免疫指标参考范围(2)以广东省11名优秀专业皮划艇运动员为模型进行调查,在四周高强度训练开始前和训练结束24 h后各进行一次肘静脉采血,使用全自动血球分析仪检测白细胞分类,使用全自动生化分析仪检测血清免疫球蛋白,使用ELISA试剂盒检测血清IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10,使用流式细胞术检测淋巴细胞亚群及调节性T细胞,使用SPSS软件对数据进行统计,探讨四周高强度训练对专业运动员免疫功能的影响。(3)用佛波醇酯(PDB)+离子霉素(Ion)激活人PBMC和Jurkat T细胞,利用免疫荧光染色结合流式细胞术分析人PBMC中CD3+T细胞活化抗原CD69和CD25的表达,用流式微球阵列检测Cuc E对活化的PBMC和Jurkat T细胞白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)表达的影响情况,用定量PCR(q PCR)法检测Cuc E对IL-2、TNF-α和IFN-γm RNA表达的影响情况,用免疫印迹法检测NF-κB信号通路和MAPKs信号通路的相关蛋白的表达,用免疫荧光分析法观察NF-κB/p65的核转位情况,探讨葫芦素E对适应性免疫功能的调节作用,评价其作为调节运动员调节药物的潜在可能性。结果:(1)广东省专业运动员白细胞计数参考范围为(3.7~8.8)×109个/升,嗜中性粒细胞计数参考范围为(1.6~5.2)×109个/升,淋巴细胞计数参考范围为(1.4~3.4)×109个/升,单核细胞计数参考范围为(0.16~0.58)×109个/升,嗜酸性粒细胞计数参考范围为(0~0.5)×109个/升,嗜碱性粒细胞计数参考范围为(0~0.1)×109个/升,嗜中性粒细胞百分比参考范围为(37~66)%,淋巴细胞百分比参考范围为(25~52)%,单核细胞百分比参考范围为(2.5~8.4)%,嗜酸性粒细胞百分比参考范围为(1~7)%,嗜碱性粒细胞计数百分比参考范围为(0~1.5)%,免疫球蛋白G参考范围为(7.58~16.91)g/L,免疫球蛋白A参考范围为(0.80~3.49)g/L,免疫球蛋白M参考范围为(0.53~3.41)g/L。(2)四周高强度训练后,白细胞计数极显著降低(P0.01),嗜中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、嗜中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比和单核细胞百分比无显著差异(P0.05);血清免疫球蛋白G极显著降低(P0.01),免疫球蛋白A和免疫球蛋白M无显著差异(P0.05);血清IL-6水平显著升高(P0.05),IL-8和TNF-α极显著升高(P0.01),IL-10水平极显著降低(P0.01);B细胞百分比、B细胞计数、CD3+CD4+细胞百分比、CD3+CD4+细胞计数显著下降(P0.05),CD3+CD4+/CD3+CD8+比值极显著下降(P0.01),NK细胞百分比、NK细胞计数、T细胞百分比、T细胞计数、CD3+CD8+细胞百分比、CD3+CD8+细胞计数无显著变化(P0.05);CD4+CD25+Fox P3+Treg/CD4+比值和CD4+CD25+Fox P3+Treg细胞计数也无显著变化(P0.05)。(3)Cuc E能明显抑制PDB+Ion激活的PBMC中CD3+T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达,可以剂量依赖方式抑制活化的PBMC和Jurkat T细胞的IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达,并且在m RNA水平上均可抑制活化Jurkat T细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ转录,对信号通路研究发现Cuc E显著抑制活化Jurkat T细胞胞浆IκB和NF-κB/p65磷酸化水平,并抑制NF-κB/p65核转位,而对p38MAPK、JNK和Erk1/2的磷酸化水平无显著下调作用。结论:专业运动员多项免疫指标处于普通人群参考范围较低水平,高强度训练可导致专业运动员发生免疫抑制,同时伴随多种炎性细胞因子上升,而葫芦素E可通过下调NF-κB信号通路从m RNA水平和蛋白质水平上显著抑制细胞因子的表达,对适应性免疫具有较明显调节作用,有望成为缓解运动员运动性细胞因子上升的潜在药物。
【关键词】：专业运动员 血清免疫球蛋白 细胞因子 淋巴细胞亚群 葫芦素E NF-κB信号通路
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R87
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 绪论12-34
• 1.1 白细胞及白细胞分类14-16
• 1.2 免疫球蛋白16-17
• 1.3 运动对白细胞亚群的影响17-18
• 1.4 运动对免疫球蛋白的影响18-19
• 1.5 运动与细胞因子19-21
• 1.6 运动与淋巴细胞亚群21-23
• 1.7 运动与调节性T细胞23-24
• 1.8 天然免疫调节药物葫芦素24-32
• 1.9 本研究的目的和意义32-34
• 第二章 专业运动员白细胞分类及血清免疫球蛋白水平参考范围的建立34-48
• 2.1 前言34-35
• 2.2 实验材料与设备35
• 2.2.1 实验对象35
• 2.2.2 主要试剂35
• 2.2.3 主要仪器35
• 2.3 实验方法35-38
• 2.3.1 样品采集方法36
• 2.3.2 血常规检测方法36-37
• 2.3.3 血清免疫球蛋白检测方法37-38
• 2.3.4 统计分析38
• 2.4 实验结果38-44
• 2.4.1 广东省专业运动员白细胞及其分类调查情况38-42
• 2.4.2 广东省专业运动员免疫球蛋白三联 (Ig G/A/M) 水平调查42-44
• 2.5 讨论44-47
• 2.5.1 对广东省专业运动员白细胞分类水平的调查44-46
• 2.5.2 对广东省专业运动员血清免疫球蛋白水平调查46-47
• 2.6 结论47-48
• 第三章 四周高强度训练对专业运动员免疫功能的影响48-66
• 3.1 前言48
• 3.2 实验材料与设备48-50
• 3.2.1 实验对象49
• 3.2.2 主要试剂49
• 3.2.3 主要仪器49-50
• 3.3 实验方法50-54
• 3.3.1 训练安排50
• 3.3.2 样品采集方法50
• 3.3.3 血常规检测方法50-51
• 3.3.4 血清免疫球蛋白检测方法51-52
• 3.3.5 血清细胞因子检测方法52
• 3.3.6 淋巴细胞亚群检测方法52-53
• 3.3.7 分离外周血PBMC53
• 3.3.8 人外周血Fox P3+调节性T细胞检测方法53
• 3.3.9 流式细胞仪设置53-54
• 3.3.10 统计分析54
• 3.4 实验结果54-59
• 3.4.1 四周高强度训练对专业运动员白细胞分类的影响54-55
• 3.4.2 四周高强度训练对专业运动员免疫球蛋白的影响55
• 3.4.3 四周高强度训练对专业运动员细胞因子的影响55-56
• 3.4.4 四周高强度训练对专业运动员外周血淋巴细胞亚群的影响56-58
• 3.4.5 四周高强度训练对专业运动员调节性T细胞的影响58-59
• 3.5 讨论59-65
• 3.5.1 四周高强度训练对专业运动员白细胞亚群的影响59-60
• 3.5.2 四周高强度训练对专业运动员免疫球蛋白的影响60-61
• 3.5.3 四周高强度训练对专业运动员细胞因子的影响61
• 3.5.4 四周高强度训练对专业运动员外周血淋巴细胞亚群的影响61-64
• 3.5.5 四周大强度训练对运动员外周血Fox P3+ Treg的影响64-65
• 3.6 结论65-66
• 第四章 葫芦素E的免疫调节作用及其机制研究66-91
• 4.1 前言66
• 4.2 实验材料与设备66-70
• 4.2.1 实验材料67-68
• 4.2.2 主要仪器68
• 4.2.3 主要溶液配方68-70
• 4.3 实验方法70-78
• 4.3.1 细胞培养70
• 4.3.2 分离人外周血单个核细胞70-71
• 4.3.3 药物浓度MTT实验71-72
• 4.3.4 PBMC活化表面分子检测72
• 4.3.5 细胞培养液上清细胞因子检测72-74
• 4.3.6 RNA抽提及逆转录74
• 4.3.7 实时定量RT-PCR74-75
• 4.3.8 细胞浆蛋白抽提75-76
• 4.3.9 细胞核蛋白抽提76
• 4.3.10 免疫印迹分析76-77
• 4.3.11 免疫荧光分析77-78
• 4.3.12 统计分析78
• 4.4 实验结果78-86
• 4.4.1 药物毒性实验结果78-79
• 4.4.2 Cuc E抑制PBMC活化表面分子的表达79-80
• 4.4.3 Cuc E抑制PBMC细胞因子的表达80-81
• 4.4.4 Cuc E抑制Jurkat T细胞因子的表达81-82
• 4.4.5 Cuc E抑制Jurkat T IL-2、TNF-α 和IFN-γ m RNA的表达水平82-83
• 4.4.6 Cuc E对NF-κB信号通路和MAPKs信号通路的影响83-86
• 4.5 讨论86-90
• 4.5.1 Cuc E抑制PBMC活化表面分子的表达86-88
• 4.5.2 Cuc E从蛋白水平和转录水平上抑制细胞因子的表达88-89
• 4.5.3 Cuc E对NF-κB和MAPKs信号通路的影响89-90
• 4.6 结论90-91
• 第五章 全文总结91-93
• 5.1 本研究的主要结果和结论91
• 5.2 本研究的主要创新点91-93
• 参考文献93-112
• 附录 基金项目112-113
• 在校期间发表文章113-114
• 缩略词表114-116
• 致谢116

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 冯炜权;对运动疲劳机理的再认识[J];北京体育大学学报;2003年04期

2 任保莲;一次大运动量训练课和400m跑对女子田径运动员血IgA、IgM、IgG的影响[J];北京体育大学学报;2004年06期

3 蒋桂凤,黄祁平,万艳平;有氧运动对女大学生免疫球蛋白水平的影响[J];北京体育大学学报;2005年08期

4 魏宏文;魏宏强;裴怡然;肖卓威;高伟;杨和平;;中国国家女子手球队运动员赛前训练的生化特点及机能评定[J];北京体育大学学报;2007年04期

5 董矜;田亚平;高艳红;李立青;;运动所致淋巴细胞亚群与免疫分子表达变化的研究[J];南方医科大学学报;2010年10期

6 罗海萍;运动与免疫关系的研究进展[J];国外医学(物理医学与康复学分册);1997年01期

7 廖继东;血细胞生成调节中的神经递质类物质[J];国外医学.输血及血液学分册;1998年01期

8 杨凯;郑刚;;葫芦素BE的药理作用研究进展[J];国际中医中药杂志;2006年01期

9 严俊,姚X,周瑶玺;T细胞活化信号传递的分子基础[J];国外医学(免疫学分册);1993年04期

10 王力先;赵君军;李捷;廖红娟;丘卫;季健民;张援;;夏训对优秀皮划艇运动员铁调素等铁营养状况以及IL-6的影响[J];广州体育学院学报;2014年05期

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本文编号：577895