珠子参促进造血活性及其多糖分析研究

发布时间：2017-08-21 14:06

  本文关键词：珠子参促进造血活性及其多糖分析研究

  更多相关文章： 珠子参 白细胞减少症 造血活性 多糖 结构特征

【摘要】：珠子参为五加科植物珠子参或羽叶三七的干燥根茎,具有滋补强壮,补肺养阴,活络止血,补血的功效。主要用于气阴两虚,虚弱乏力,咳血,烦热口渴,吐血,外伤出血,关节肿痛等症,为民间常用中药。研究表明,珠子参具有良好的促进免疫和造血功能的作用,但其作用机制尚不明确。珠子参多糖具有良好的促进免疫和抗肿瘤活性,但有关其结构研究的报道较少。本研究以陕西省宝鸡市红河谷地区所产珠子参(Panax japonicus C. A. Mey. var. major(Burk.) C. Y. Wu et K. M. Feng)为研究对象,考察珠子参水溶性成分是否具有促进造血活性,研究表明珠子参粗提物具有良好的升白作用,珠子参水提物、珠子参粗多糖、珠子参总皂苷均具有良好的促进造血活性。这些实验结果证明珠子参多糖可能为珠子参活性组分,因此进一步研究以珠子参粗多糖为研究对象,对其组成、结构和活性进行研究,结果从中分离得到五个组分：PJPS1、PJPS2、PJPS3、PJPS4、PJPS5,其中组分PJPS1含量最高,由两种均一性多糖PJPS1-A和P JPS1-B组成,PJPS1-A为PJPS1主要组分,并对PJPS1-A的结构和造血活性进行研究。主要工作内容和研究结果包括以下几个方面：1.珠子参对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的影响通过腹腔注射环磷酰胺(CPX)造成小鼠白细胞减少症模型,灌胃给予珠子参粗提物后观察小鼠体重、脏器指数变化,检测每只小鼠血WBC、HGB、PLT、ALB、ALT、BUN、Crea等水平。结果显示珠子参粗提物组小鼠血WBC、LY、PLT等水平均较模型对照组显著提高,表明珠子参对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症有改善作用。2.珠子参对血虚模型小鼠造血功能的影响通过腹腔注射CPX和皮下注射乙酰苯肼(APH)联合造模的方法造成小鼠血虚模型,分别灌胃给予不同剂量的珠子参粗提物(PJE)、珠子参总皂苷(PJSM)、珠子参粗多糖(PJPS)后观察小鼠体重、脏器指数变化,检测每只小鼠RBC、WBC、HGB等水平变化,酶联免疫法检测血清IL-3、IL-6、EPO、M-CSF、GM-CSF水平变化,并采用免疫组化法检测脾脏中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果发现PJE、PJPS和PJSM都具有促进造血活性,PJE、PJPS和PJSM可以加速血虚模型小鼠血RBC、WBC、HGB水平的恢复,其促进造血活性的机制可能与刺激血清IL-3、IL-6、EPO、GM-CSF、 M-CSF分泌和抗脾细胞凋亡有关。3.珠子参多糖的分离纯化和部分理化·性质研究通过水提醇沉、sevage法除蛋白、DEAE-52离子交换色谱和凝胶过滤色谱等方法从珠子参中提取分离得到五个组分：PJPS1、PJPS2、PJPS3、PJPS4、PJPS5,其中组分PJPS1含量最高,由多糖PJPS1-A和PJPS1-B组成,PJPS1-A为PJPS1主要组分,因此对PJPSl-A紫外和红外吸收光谱、单糖组成以及糖含量等理化性质进行了检测,结果显示其相对分子质量为1.1×104Da,糖含量为93.1%,蛋白含量为1.5%,单糖组成为葡萄糖和半乳糖,摩尔比为9.1：1。4.珠子参多糖PJPS1-A的结构研究采用酸水解、甲基化方法结合气质联用、液质联用、核磁共振等手段对PJPS1-A的结构进行解析,推断出PJPS1-A的结构可能为：以(1→4)-Glc构成主链,在C-6位存在分支,分支为(1→6)-Gal,末端为葡萄糖残基,其糖苷键构型均为a型。5.珠子参多糖PJPS1-A对血虚模型小鼠造血功能的影响通过腹腔注射CPX和皮下注射APH联合造模的方法造成小鼠血虚模型,分别灌胃给予不同剂量的PJPS1-A后观察小鼠体重、脏器指数的变化,检测每只小鼠RBC、WBC、HGB、PLT等水平变化,酶联免疫法检测小鼠血清IL-3、IL-6、EPO、M-CSF、 GM-CSF水平变化,并采用免疫组化法检测小鼠脾脏中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果发现PJPS1-A与PJPS作用一致,同样具有促进造血活性,可以加速血虚模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的恢复,其促进造血活性的机制可能与刺激血清IL-3、IL-6、EPO、GM-CSF分泌和抗脾细胞凋亡有关。
【关键词】：珠子参 白细胞减少症 造血活性 多糖 结构特征
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R284
【目录】：

• 英文缩写词表3-5
• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 前言14-33
• 1.1 珠子参研究概述14-20
• 1.1.1 珠子参的来源14
• 1.1.2 珠子参的功效14
• 1.1.3 珠子参的植物形态14
• 1.1.4 珠子参的药用历史14-15
• 1.1.5 资源分布与生长环境15
• 1.1.6 化学成分15-17
• 1.1.7 药理作用17-20
• 1.2 细胞因子对造血功能的调控作用20-22
• 1.2.1 造血细胞因子对巨核系造血功能的调控作用21
• 1.2.2 造血细胞因子对红系造血功能的调控作用21-22
• 1.2.3 造血细胞因子对淋巴系造血功能的调控作用22
• 1.3 多糖研究概述22-30
• 1.3.1 多糖分类22-23
• 1.3.2 多糖活性研究进展23-26
• 1.3.3 多糖结构解析方法26-30
• 1.4 本研究的目的和意义30-31
• 1.5 研究技术路线31-33
• 第二章 珠子参对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的影响33-45
• 2.1 实验材料33-34
• 2.1.1 仪器与试剂33
• 2.1.2 药材33
• 2.1.3 动物33-34
• 2.1.4 样品制备34
• 2.2 试验方法34
• 2.2.1 剂量的选择34
• 2.2.2 分组及给药34
• 2.2.3 统计方法34
• 2.3 结果34-41
• 2.3.1 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠体重的影响34-35
• 2.3.2 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠脏器指数的影响35-36
• 2.3.3 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠肝功能的影响36-37
• 2.3.4 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠血清蛋白代谢的影响37
• 2.3.5 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠肾功能的影响37-38
• 2.3.6 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠血清ALP水平的影响38
• 2.3.7 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠白细胞计数的影响38-40
• 2.3.8 PJE对环磷酰胺所致白细胞减少小鼠血小板的影响40-41
• 2.4 讨论41-45
• 第三章 珠子参对血虚模型小鼠造血功能的保护作用45-58
• 3.1 实验材料45-46
• 3.1.1 仪器与试剂45
• 3.1.2 药材45-46
• 3.1.3 动物46
• 3.1.4 样品制备46
• 3.2 试验方法46-48
• 3.2.1 细胞因子ELISA检测方法46-47
• 3.2.2 动物实验47-48
• 3.3 结果48-56
• 3.3.1 PJE、PJPS、PJSM对血虚模型小鼠体重、脏器指数的影响48
• 3.3.2 PJE、PJPS、PJSM对血虚模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的影响48-50
• 3.3.3 PJE、PJPS、PJSM对血虚模型小鼠脾脏Bcl-2、Bax蛋白表达的影响50-54
• 3.3.4 PJE、PJPS、PJSM对血虚模型小鼠血清造血细胞因子水平的影响54-56
• 3.4 讨论56-58
• 第四章 珠子参多糖的分离纯化及理化性质研究58-69
• 4.1 实验材料58-59
• 4.1.1 实验药物58
• 4.1.2 试剂58
• 4.1.3 仪器58-59
• 4.2 实验方法59-62
• 4.2.1 珠子参粗多糖的提取59
• 4.2.2 珠子参多糖的分离纯化59-62
• 4.3 实验结果62-67
• 4.3.1 珠子参多糖的分离纯化62-63
• 4.3.2 PJPS1-A纯度与分子量测定63-64
• 4.3.3 单糖组成测定结果64-65
• 4.3.4 糖含量测定结果65
• 4.3.5 蛋白质含量测定结果65-66
• 4.3.6 紫外吸收光谱特征66
• 4.3.7 红外吸收光谱特征66-67
• 4.4 讨论67-69
• 第五章 水提珠子参多糖PJPS1-A的结构研究69-77
• 5.1 实验试剂与仪器69
• 5.1.1 试剂69
• 5.1.2 仪器69
• 5.2 实验方法69-70
• 5.2.1 PJPS1-A的甲基化69-70
• 5.2.2 PJPS1-A的核磁共振分析70
• 5.3 实验结果70-76
• 5.3.1 PJPS1-A的甲基化分析70-73
• 5.3.2 PJPS1-A的600 MHz ~1H NMR、~(13)C NMR谱图分析73-76
• 5.4 讨论76-77
• 第六章 珠子参多糖PJPS1-A对血虚模型小鼠造血功能的保护作用77-92
• 6.1 实验材料77
• 6.1.1 仪器与试剂77
• 6.1.2 药物77
• 6.1.3 动物77
• 6.2 实验方法77-78
• 6.2.1 细胞因子ELISA检测方法77-78
• 6.2.2 动物实验78
• 6.3 结果78-91
• 6.3.1 PJPS1-A对血虚模型小鼠体重、脏器指数的影响78-80
• 6.3.2 PJPS1-A对血虚模型小鼠WBC、RBC、HGB水平的影响80-82
• 6.3.3 PJPS1-A对血虚模型小鼠脾脏Bcl-2、Bax蛋白表达的影响82-89
• 6.3.4 PJPS1-A对血虚模型小鼠血清EPO、IL-3、IL-6、GM-CSF水平的影响89-90
• 6.3.5 PJPS1-A对血虚模型小鼠血清IgM、IgA水平的影响90-91
• 6.4 讨论91-92
• 结论92-93
• 参考文献93-102
• 致谢102-103
• 攻读博士期间科研成果103-104
• 作者简介104-105

【参考文献】

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本文编号：713303