J亚群禽白血病病毒与马立克氏病病毒协同致病研究

发布时间：2018-06-10 16:11

本文选题：J亚群禽白血病病毒 + 马立克氏病病毒　；参考：《山东农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和马立克氏病病毒(MDV)共感染和协同致病的现象广泛发生,给我国养禽业带来了严重的损失,然而,关于ALV-J和MDV协同感染机制尚不明了。本研究在证明ALV-J和MDV具有共同感染同一细胞能力的基础上,拟通过对共感染ALV-J和MDV在细胞转录水平、蛋白表达水平、细胞因子及病理组织学等与单独感染的差异性分析,证明ALV-J与MDV具有协同促进相互复制,协同增强感染和致病能力,为揭示ALV-J和MDV协同感染机制,研究联合防控及其它病毒间协同感染机制奠定了科学基础。以10日龄无特定病原(SPF)鸡胚制备鸡胚成纤维细胞(CEF),接种ALV-J-NX0101病毒和MDV-MD5株病毒,设置4个实验组:ALV-J+MDV感染组,ALV-J感染组,MDV感染组和无病毒空白对照组。经PCR、间接免疫荧光(IFA)和禽白血病抗原(p27)检测实验组接毒成功。荧光定量结果显示,在24h,ALV-J和MDV开始复制,72h前,共感染组细胞中MDV和ALV-J病毒RNA的复制速度和复制量均高于单独感染组(P0.05),但由于细胞出现病变,表达高峰后共感染组病毒RNA表达量下降明显快于单独感染组(P0.05),证明了共感染组病毒具有更强的转录能力,对细胞损伤更严重,从而从病毒转录层面证明了MDV和ALV-J的协同促进复制和细胞致病作用;Western Blot结果显示共感染72h的各组细胞蛋白的表达量出现明显的差异,共感染组明显高于单独感染组,从而在蛋白层面证明了共感染组两种病毒协同促进各自蛋白的表达;激光共聚焦结果显示,与单独感染MDV组相比,共感染组出现病变的时间提前24h,噬斑数量增加明显;与单独感染ALV-J组相比,相同时间点,共感染组感染ALV-J的细胞数量更多,病毒在细胞内的复制量更大,对细胞的损伤更严重,说明MDV和ALV-J可感染同一细胞,且具有协同促进各自的复制能力和感染能力;体外实验选取了与肿瘤有关的三种细胞因子(IL-6、IL-10、TGF-β),通过对此3种细胞因子表达水平的变化,说明共感染能促进炎症反应、增加免疫抑制作用、促进细胞分化,两种病毒能有效改变细胞微环境来促进病毒表达。为了进一步验证MDV与ALV-J的体内协同作用,我们进行了体内感染实验,并在接种后1、3、5周龄连续剖杀三次。通过病理组织学和血液学分析,进一步证明了两种病毒具有协同致病作用。血液学检测显示,混合感染组外周血白细胞数高于单独感染组,明显高于空白对照组,其中淋巴细胞和粒细胞数增加最明显;通过临床病理学、病理组织学进行动态的病理学研究。发病情况结果显示,共感染组、ALV-J感染组和MDV感染组分别在3、4周开始死亡,总体死亡率分别为20.0%、3.33%和10.0%。大体病变结果显示,混合感染组2~4周肝、脾、肾稍肿大,并有肝周炎、心包炎等,所有组织器官在2周时开始出现以幼稚淋巴细胞、大中小淋巴细胞为主的炎性浸润灶,以4~5周最为明显,共感染比单独感染发病早1~2周、病变更明显。提示共感染可加重初期的炎症反应,使病死率升高,加快了病毒致瘤进程。本研究从不同层面和角度揭示了ALV-J和MDV的协同复制及致病作用,不仅对后续研究ALV-J与MDV协同机制明确了方向,更将为禽肿瘤病或其它禽病研究提供科学的理论依据,为预防和治疗禽肿瘤病提供新的思路。
[Abstract]:The results showed that ALV - J and MDV were co - infected with MDV - J and MDV - MD5 . In order to further verify the co - infection of MDV and ALV - J , the results showed that the co - infection group , ALV - J infection group and MDV infection group started to death at 3 and 4 weeks . The results showed that the co - infection could increase the initial inflammatory response , and the overall mortality rate was 20 . 0 % , 3 . 33 % and 10 . 0 % .
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.3

【参考文献】