稻瘟病菌AGC激酶功能分析及其潜在应用

发布时间：2024-07-11 03:03

　　水稻稻瘟病是由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的真菌性病害。广泛分布于世界各水稻种植区,发生时严重影响水稻产量,造成严重的经济损失。稻瘟病菌在水稻各个生长时期均可发生,其中穗颈瘟危害最为严重。稻瘟病菌具有典型的侵染循环,分生孢子通过风、雨水传播,落到植物表面,在合适的温度湿度下形成附着胞;附着胞内部积聚巨大的膨压,形成侵染栓侵入寄主植物细胞,侵染菌丝在细胞间扩展,引起病变,病斑形成新的分生孢子进行再次侵染。AGC激酶是一类传统的Ser/Thr蛋白激酶,在真核生物中高度保守。该家族很多激酶受TOR(target of rapamycin)调控,对细胞生长、发育以及生存具有重要的生理意义。本研究以稻瘟病菌AGC激酶为研究对象,通过基因敲除、表型分析、细胞学分析以及胁迫应答等实验,分析了AGC激酶在稻瘟病菌生长、发育和致病过程中的作用。通过同源序列比对,我们鉴定出22个AGC激酶家族基因,构建了12个基因敲除载体,最终得到7个基因敲除突变体:ΔMo07012、ΔMo01260、ΔMo05074、ΔMo10181、ΔMo09519、ΔMo02757、ΔMo12408;其中M...

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【部分图文】：

图1.1稻瘟病菌的侵染循环(WilsonandTalbot,2009)

浙江大学硕士学位论文2水稻叶片表皮。通过侵染菌丝侵染植物组织，引起稻瘟病的症状。在高温高湿条件下，病害部位产生大量分生孢子，并通过风、雨水传播到新的寄主植物上，进行再侵染(WilsonandTalbot,2009;周建明等,1999)。图1.1稻瘟病菌的侵染循环(Wilsonan....

图3.1基因敲除原理(Luetal.,2014)

浙江大学硕士学位论文27图3.1基因敲除原理(Luetal.,2014)A.PKO1B骨架载体图；B.利用ClonExpressTMMultiSOneStepCloningKit构建敲除载体示意图；C.ATMT同源替换目的基因原理图；D.利用显微镜观察GFP荧光，初步筛选转化子；....

图3.2稻瘟病菌AGC激酶基因敲除双重PCR电泳验证

浙江大学硕士学位论文283.1.2敲除突变体的筛选和验证通过农杆菌介导转化法（ATMT）将测序正确的目的载体转入到稻瘟病菌，数天后在含草胺磷的抗性平板上长出转化子，通过荧光显微镜观察转化子有无荧光进行初步筛选，选取不含荧光的转化子到抗性平板上进行二次筛眩数天后，提取转化子的基因组....

图3.3稻瘟病菌AGC激酶突变体菌落形态及相对生长速率

浙江大学硕士学位论文30图3.3稻瘟病菌AGC激酶突变体菌落形态及相对生长速率A.AGC激酶突变体在CM平板上生长一周后的菌落形态；B.AGC激酶突变体的相对生长速率（相对生长速率=突变体的菌落生长直径/野生型的菌落生长直径），实验独立重复三次结果取平均值，利用SPSS进行单因素....

本文编号：4005153