玉米北方炭疽病菌（Aureobasidium zeae）生物学特性及ATMT遗传转化体系建立

发布时间：2018-06-23 01:28

  本文选题：玉米北方炭疽病菌 + 生物学特性　； 参考：《沈阳农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：玉米北方炭疽病又称玉米眼斑病,是世界玉米产区的重要叶部病害,是由玉蜀黍出芽短梗霉(Aureobsidium zeae)侵染玉米叶片引起的。目前关于玉米北方炭疽病的报道多集中于病害发生危害、典型症状特征描述等方面,对于其病原菌致病机制的研究还未见报道。因此本研究通过形态学和分子生物学方法鉴定了致病菌,并对病原菌的生物学特性进行了研究;筛选出6种自交系用于病原菌致病力分化鉴定,明确了该病害分级标准;建立了玉米北方炭疽病菌ATMT遗传转化体系,对遗传转化条件进行了优化,并对转化子形态特征和致病力进行检测,为从分子层面揭示玉米北方炭疽病菌的致病机制奠定基础。研究结果如下:1.分离并鉴定了玉米北方炭疽病菌根据病原形态特征、ITS序列信息和回接试验鉴定玉米北方炭疽病的致病菌为玉蜀黍出芽短梗霉(Aureobbasidium zeae(NaritaHiratsuka)Dingley)。2.确定了玉米北方炭疽病菌的生物学特性该病菌菌丝生长温度范围为10～30℃,最适温度为25℃,最适pH为7,光照条件为全黑暗,适宜的碳、氮源和培养基分别为蔗糖、硝酸钾和马铃薯葡萄糖琼脂培养基;其分生孢子产生的最适碳源为葡萄糖,其它最适宜生长条件与菌丝相同,该病菌在添加不同氮源的水琼脂培养基中均不产生分生孢子;其分生孢子萌发的最适条件为28℃、pH 8、光暗交替,最适碳、氮源分别为麦芽糖和牛肉膏,单一氮源条件对分生孢子的萌发有抑制作用。3.玉米北方炭疽病菌致病力分化鉴定对来自于6个省份的106份玉米北方炭疽病标样进行了分离,获得菌株78株。根据病原菌接种56种自交系后的苗期发病情况,筛选出6种自交系研究了该病菌致病力分化。根据菌落形态特征和致病力,筛选出强致病力菌株A.z-01。4.玉米北方炭疽病菌ATMT遗传转化体系建立及条件优化农杆菌遗传转化玉米北方炭疽病菌的最佳体系为:浓度为106个·mL-1玉米北方炭疽病菌分生孢子,25℃黑暗下萌发4d后与浓度为OD600= 0.6的含有潮霉素和绿色荧光蛋白基因双元载体的农杆菌AGL-1,按3:1的比例混合,诱导1h后,共培养48h.利用该体系获得了 350个转化子。5.转化子菌落形态及致病力分析根据转化子在PDA培养基上的菌落形态,转化子主要分为5种类型,并对转化子的致病力进行分析,发现大多数转化子可侵染玉米植株发病,接种后病斑主要分为5种类型,再分离后进行荧光检测发现,获得的菌株均带有绿色荧光。
[Abstract]:The research results are as follows : 1 . The research results are as follows : 1 . The research results are as follows : 1 . The research results are as follows : 1 . The research results are as follows : 1 . The genetic transformation system of the northern anthrax pathogen of corn is identified , the optimum temperature is 25 鈩，

本文编号：2055119