贝莱斯芽孢杆菌S6的鉴定、发酵条件优化及其生防作用研究

发布时间：2019-08-07 06:28

【摘要】：本试验以番茄早疫病原菌(Alternaria solani)、灰霉病原菌(Botrytis cinerea)为靶标病菌,对从多年种植番茄的园艺大棚土壤中分离和筛选到抑菌效果较好的生防细菌菌株S6。通过菌株形态特征、生理生化试验结合分子生物学分析对菌株S6进行鉴定,对菌株S6的不同营养条件和不同培养条件筛选、拮抗物质的分离纯化及其抑菌机制初步研究。得到结果如下:1.通过对菌株S6的形态特征观察、生理生化试验及分子生物学分析,菌株S6鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。2.通过菌株S6生长曲线的测定,培养16 h的菌液最合适做种子液;采用单因素试验和正交试验对菌株S6的营养条件进行优化,优化后培养基组合为葡萄糖2%,酵母浸粉0.5%,KCl 0.75%,1000 mL蒸馏水;采用单因素试验对菌株S6的培养条件进行优化,最佳培养条件为培养时间3 d,培养温度30℃,摇床转速210 r/min,接种量为3%,装液量为60/250 mL,pH 7.23。3.采用硫酸铵沉淀法对发酵液进行分级沉淀,确定析出蛋白所需(NH4)2SO4的饱和度80%,通过阴离子交换、SuperdexTM 75层析得到较纯的拮抗蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为20.1 kDa。该蛋白具有耐热、耐酸碱、不受紫外照射的影响等特性,是一种稳定性较好的拮抗蛋白。4.利用不同浓度拮抗蛋白,测定其对靶标病原菌的菌丝生长抑制作用、病原菌孢子萌发和菌丝形态的影响。结果表明拮抗蛋白对病原菌菌的菌丝生长及孢子萌发均有明显的抑制作用;菌丝形态明显畸形,膨胀,病菌菌丝杂乱,分支脱落,菌丝出现断裂现象。5.采用平板对峙法,检测菌株S6对常见病原菌的抑制作用;伤口接种法,检测菌株S6对不同植物是否侵染;采用喷雾法,用菌株S6发酵液进行田间防治试验。结果显示:菌株S6发酵液具有较广抑菌作用,在一定剂量范围内对植物没有侵染,发酵液对番茄早疫病有较好的防治效果。
【图文】：

菌株S6的菌落形态

菌株S6的革兰氏染色Fig.2-2TheGramstainmorphologyofstrainS6
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S476

【参考文献】

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本文编号：2523772