绵羊肺炎支原体的分离鉴定

发布时间：2020-05-17 02:12

【摘要】：绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)是引起绵羊和山羊增生性、间质性胸膜肺炎的主要病原。本试验研究对呼和浩特地区MO进行了分离鉴定,为进一步开展MO研究及疫苗的研发奠定基础。从内蒙古呼和浩特市郊区某屠宰场中挑选持续咳嗽、流涕并伴有高热的疑似患有绵羊支原体肺炎的绵羊,采集鼻拭子及肺脏共70份病料,处理后接种到改良Hayflick培养基中进行分离培养,经纯化培养后得到7株分离菌株(HSj-1、HSj-2、HSj-3、HSj-4、HSj-5、HSj-6、HSj-7)。对7株分离菌株做培养特性鉴定、生化学鉴定、血清学鉴定和分子生物学鉴定,确定7株分离菌株为MO。将形态典型、长势良好的2个分离菌株(HSj-1、HSj-6),根据文献合成一对可扩增1493bp片段的引物进行PCR扩增,结果参考株Y-98和分离株HSj-6、HSj-1均在预期处出现一条明显的条带。将电泳条带凝胶回收保存后送公司测序,与参考株的同源性分别为99%和97%。对1:6比例传代培养第5代的HSj-1、HSj-6MO分离株,采用CFU和CCU计数法从Oh开始,每6h进行一次测定,记录数据并绘制生长曲线。结果表明两株MO在实验室中的传代比例为1:6时最高菌量可达109CCU及6.1×109CFU/mL,最佳收获时间为接种后100h左右,其中HSj-6株生长性能、生长速度优于MO菌株平均生长水平,为后续试验研究及疫苗研发提供了可供选择的MO菌株。
【图文】：

３．１分离菌菌落的形态学鉴定结果逡逑眼观菌落形态：取稳定传代５代以上的分离菌株按不同比例接种于固体培养基上，逡逑将其置于Ｃ０２培养箱３７°Ｃ培养５？７ｄ后取出，肉眼可见针尖大小乳白色菌落，，如图１逡逑所示；在显微镜４0ｘ下观察固体培养基上菌落呈无中心脐的“桑甚状”，如图２所示。逡逑■邋Ａ：邋１「Ｉ逡逑图１分离菌菌落逦图２显微镜下分离菌菌落形态（４０邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｅｙｅ邋ｖｉｅｗ邋ｏｆ邋ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ邋ｃｏｌｏｎｉｅｓ逦Ｆｉｇ．２邋ＭＯ邋ｓｈａｐｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋（４０ｘ）逡逑经过姬姆萨染液染色后，在１０００Ｘ油镜下观察，分离菌菌体着色良好，形态不规逡逑贝ＩＪ，多为杆状、球状颗粒，如图３所示。逡逑丨壚屸Ｖ，：．＇逡逑＊邋＾邋．：．－＇＇＇逡逑？逦＊逦Ｓ逡逑．／邋．Ｖ邋一．邋＊＇＇邋；邋Ｉ逡逑—逡逑ｒ＾逡逑图３分离菌姬姆萨染色结果（１０００邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｉｅｍｓａ邋ｏｉｌ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（１０００ｘ）逡逑

眼观菌落形态：取稳定传代５代以上的分离菌株按不同比例接种于固体培养基上，逡逑将其置于Ｃ０２培养箱３７°Ｃ培养５？７ｄ后取出，肉眼可见针尖大小乳白色菌落，如图１逡逑所示；在显微镜４0ｘ下观察固体培养基上菌落呈无中心脐的“桑甚状”，如图２所示。逡逑■邋Ａ：邋１「Ｉ逡逑图１分离菌菌落逦图２显微镜下分离菌菌落形态（４０邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｅｙｅ邋ｖｉｅｗ邋ｏｆ邋ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ邋ｃｏｌｏｎｉｅｓ逦Ｆｉｇ．２邋ＭＯ邋ｓｈａｐｅ邋ｕｎｄｅｒ邋ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋（４０ｘ）逡逑经过姬姆萨染液染色后，在１０００Ｘ油镜下观察，分离菌菌体着色良好，形态不规逡逑贝ＩＪ，多为杆状、球状颗粒，如图３所示。逡逑丨壚屸Ｖ，：．＇逡逑＊邋＾邋．：．－＇＇＇逡逑？逦＊逦Ｓ逡逑．／邋．Ｖ邋一．邋＊＇＇邋；邋Ｉ逡逑—逡逑ｒ＾逡逑图３分离菌姬姆萨染色结果（１０００邋Ｘ）逡逑Ｆｉｇ．３邋Ｇｉｅｍｓａ邋ｏｉｌ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（１０００ｘ）逡逑
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.26

【参考文献】

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1 江锦秀;林u&;林裕胜;江斌;胡奇林;;绵羊肺炎支原体FJ01-CL株的分离和鉴定[J];福建农业学报;2015年05期

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3 胡长敏;郭爱珍;;牛支原体病的流行特点与防控措施[J];兽医导刊;2011年11期

4 封绵;宫玉春;朱子洁;梁武;;禽败血支原体病的综合防制[J];兽医导刊;2010年11期

5 张岁丑;;羊支原体肺炎的病症及药物防治[J];养殖技术顾问;2009年12期

6 白永平;彭广能;马晓平;钟志军;石梅;谭敏;封海波;石锦江;;绵羊支原体肺炎的诊断及防制[J];中国兽医杂志;2008年05期

7 杜永凤;文心田;曹三杰;肖驰;易佳;;山羊传染性胸膜肺炎病原分离与鉴定[J];中国预防兽医学报;2006年06期

8 李媛;陶岳;阿依吐拉·肉孜;高玉龙;尹训南;李新萍;张孝恩;王砚范;辛九庆;;从湖羊肺脏中分离绵羊肺炎支原体的鉴定[J];中国预防兽医学报;2006年04期

9 魏然,高红,刘红,孙淑滨,魏嵬;直接培养法检测支原体方法的建立[J];微生物学免疫学进展;2004年03期

10 张莉,王作艳,孙继国,林密,薛拥志;绵羊肺炎支原体的微生物学特性的研究[J];河北农业大学学报;2003年S1期

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1 高媛;绵羊肺炎支原体生长曲线的测定及灭活疫苗的制备[D];内蒙古农业大学;2017年

2 孙喜安;绵羊肺炎支原体内蒙古地方株的分离鉴定及交叉反应性的测定[D];内蒙古农业大学;2012年

3 郝瑞霞;绵羊肺炎支原体的分离鉴定及全基因组序列的测定和分析[D];内蒙古农业大学;2012年

本文编号：2667751