水稻纹枯病菌及稻曲病菌LAMP检测体系的建立与应用
发布时间：2021-04-20 23:45
水稻纹枯病和稻曲病是水稻生长过程中严重影响水稻产量和质量的两大重要病害,随着施肥水平的提高和种植制度的多样化,水稻纹枯病和稻曲病的发生日趋严重。本研究利用分子鉴定的方法明确了中国东北主要稻区水稻纹枯病病原菌种类及融合群的归属情况,并分别建立了水稻纹枯病优势致病菌茄丝核菌（Rhizoctomia solani AG1-IA）及稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测体系,实现了两种病原菌的田间快速检测。具体研究结果如下:东北三省水稻纹枯病原菌种类及融合群的分子鉴定:2015-2017年从黑龙江省、吉林省和辽宁省的17个水稻主产区采集水稻纹枯病病样,分离得到水稻纹枯病菌214株,运用不同病原菌及融合群的特异性引物对214株水稻纹枯病菌进行病原菌种类和融合群鉴定,并利用r DNA内转录间隔区（ITS）序列分析法,对供试水稻丝核菌的融合群归属进行了分析。结果表明:供试214株水稻纹枯病菌分属于茄丝核菌（Rhizoctonia solani）和水稻丝核菌（Rhizocton...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 水稻纹枯病菌和稻曲病菌检测方法研究进展
1.1 水稻纹枯病及其病原菌研究概况
1.1.1 水稻纹枯病的危害与症状
1.1.2 水稻纹枯病原菌特性及其分类
1.1.3 丝核菌融合群鉴定方法研究进展
1.1.4 水稻纹枯病菌的侵染循环
1.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）检测方法研究进展
1.2.1 常规组织分离病原菌检测
1.2.2 现代生物分子技术检测方法研究进展（Rhizoctonia solani AG1-IA）
1.3 稻曲病及其病原菌研究概况
1.3.1 稻曲病的危害与症状
1.3.2 稻曲病菌侵染循环
1.4 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）检测方法研究进展
1.4.1 常规组织分离病原菌检测
1.4.2 现代生物分子技术检测方法研究进展（Ustilaginoidea virens）
1.5 环介导等温扩增技术（LAMP）研究进展
1.5.1 LAMP技术的原理和结果判定方法
1.5.2 LAMP技术的应用
1.5.3 LAMP技术的优点和不足
1.6 论文选题依据
第二章 东北三省水稻纹枯病原菌种类及融合群的分子鉴定
2.1 材料与方法
2.1.1 供试水稻纹枯病菌的采集和分离
2.1.2 供试培养基
2.1.3 供试试剂
2.1.4 供试仪器
2.1.5 供试水稻纹枯病菌DNA提取
2.1.6 供试菌株的PCR分子鉴定及ITS序列分析
2.2 结果与分析
2.2.1 东北三省水稻纹枯病病原菌种类鉴定
2.2.2 茄丝核菌融合群分子鉴定
2.2.3 水稻丝核菌融合群ITS序列分析
2.3 本章小结
第三章 水稻纹枯病菌LAMP检测体系的建立及应用
3.1 材料与方法
3.1.1 供试菌株
3.1.2 引物设计与筛选
3.1.3 LAMP反应体系的建立及优化
3.1.4 LAMP反应扩增结果判断方法
3.1.5 RS-ITS-LAMP体系的特异性验证
3.1.6 RS-ITS-LAMP体系灵敏度检测
3.1.7 RS-ITS-LAMP检测技术的应用
3.2 结果与分析
3.2.1 RS-ITS-LAMP体系的反应时间和反应温度
3.2.2 RS-ITS-LAMP的反应体系优化
3.2.3 RS-ITS-LAMP体系的特异性验证
3.2.4 RS-ITS-LAMP体系灵敏度检测
3.2.5 人工接种发病植株检测
3.2.6 田间发病植株检测
3.2.7 人工添加菌丝的土壤灵敏度检测
3.2.8 田间土壤样品检测
3.3 本章小结
第四章 稻曲病菌LAMP检测体系的建立及应用
4.1 材料与方法
4.1.1 供试菌株
4.1.2 引物设计与筛选
4.1.3 LAMP反应体系的建立及优化
4.1.4 LAMP反应扩增结果判断方法
4.1.5 UV-tef-LAMP体系的特异性验证和通用性验证
4.1.6 UV-tef-LAMP体系灵敏度检测
4.1.7 UV-tef-LAMP检测技术的应用
4.2 结果与分析
4.2.1 UV-tef-LAMP体系的反应时间和反应温度
4.2.2 稻曲病菌UV-tef-LAMP反应体系单因素优化
4.2.3 稻曲病菌UV-tef-LAMP引物的特异性验证及通用性验证
4.2.4 稻曲病菌UV-tef-LAMP体系灵敏度检测
4.2.5 人工添加稻曲病菌分生孢子的土壤灵敏度检测
4.2.6 人工添加稻曲病菌厚垣孢子的土壤灵敏度检测
4.2.7 田间自然发病不同形态稻曲球的LAMP检测
4.2.8 稻田土壤中稻曲病菌的LAMP检测
4.3 本章小结
第五章 结论与讨论
5.1 结论
5.1.1 东北三省水稻纹枯病原菌种类及融合群的鉴定
5.1.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）LAMP检测体系的建立与应用
5.1.3 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）LAMP检测体系的建立与应用
5.2 讨论
5.2.1 东北三省稻区水稻纹枯病原菌种类及融合群鉴定
5.2.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）LAMP检测体系
5.2.3 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）LAMP检测体系
参考文献
致谢
攻读学位期间发表文章
本文编号：3150625
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 水稻纹枯病菌和稻曲病菌检测方法研究进展
1.1 水稻纹枯病及其病原菌研究概况
1.1.1 水稻纹枯病的危害与症状
1.1.2 水稻纹枯病原菌特性及其分类
1.1.3 丝核菌融合群鉴定方法研究进展
1.1.4 水稻纹枯病菌的侵染循环
1.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）检测方法研究进展
1.2.1 常规组织分离病原菌检测
1.2.2 现代生物分子技术检测方法研究进展（Rhizoctonia solani AG1-IA）
1.3 稻曲病及其病原菌研究概况
1.3.1 稻曲病的危害与症状
1.3.2 稻曲病菌侵染循环
1.4 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）检测方法研究进展
1.4.1 常规组织分离病原菌检测
1.4.2 现代生物分子技术检测方法研究进展（Ustilaginoidea virens）
1.5 环介导等温扩增技术（LAMP）研究进展
1.5.1 LAMP技术的原理和结果判定方法
1.5.2 LAMP技术的应用
1.5.3 LAMP技术的优点和不足
1.6 论文选题依据
第二章 东北三省水稻纹枯病原菌种类及融合群的分子鉴定
2.1 材料与方法
2.1.1 供试水稻纹枯病菌的采集和分离
2.1.2 供试培养基
2.1.3 供试试剂
2.1.4 供试仪器
2.1.5 供试水稻纹枯病菌DNA提取
2.1.6 供试菌株的PCR分子鉴定及ITS序列分析
2.2 结果与分析
2.2.1 东北三省水稻纹枯病病原菌种类鉴定
2.2.2 茄丝核菌融合群分子鉴定
2.2.3 水稻丝核菌融合群ITS序列分析
2.3 本章小结
第三章 水稻纹枯病菌LAMP检测体系的建立及应用
3.1 材料与方法
3.1.1 供试菌株
3.1.2 引物设计与筛选
3.1.3 LAMP反应体系的建立及优化
3.1.4 LAMP反应扩增结果判断方法
3.1.5 RS-ITS-LAMP体系的特异性验证
3.1.6 RS-ITS-LAMP体系灵敏度检测
3.1.7 RS-ITS-LAMP检测技术的应用
3.2 结果与分析
3.2.1 RS-ITS-LAMP体系的反应时间和反应温度
3.2.2 RS-ITS-LAMP的反应体系优化
3.2.3 RS-ITS-LAMP体系的特异性验证
3.2.4 RS-ITS-LAMP体系灵敏度检测
3.2.5 人工接种发病植株检测
3.2.6 田间发病植株检测
3.2.7 人工添加菌丝的土壤灵敏度检测
3.2.8 田间土壤样品检测
3.3 本章小结
第四章 稻曲病菌LAMP检测体系的建立及应用
4.1 材料与方法
4.1.1 供试菌株
4.1.2 引物设计与筛选
4.1.3 LAMP反应体系的建立及优化
4.1.4 LAMP反应扩增结果判断方法
4.1.5 UV-tef-LAMP体系的特异性验证和通用性验证
4.1.6 UV-tef-LAMP体系灵敏度检测
4.1.7 UV-tef-LAMP检测技术的应用
4.2 结果与分析
4.2.1 UV-tef-LAMP体系的反应时间和反应温度
4.2.2 稻曲病菌UV-tef-LAMP反应体系单因素优化
4.2.3 稻曲病菌UV-tef-LAMP引物的特异性验证及通用性验证
4.2.4 稻曲病菌UV-tef-LAMP体系灵敏度检测
4.2.5 人工添加稻曲病菌分生孢子的土壤灵敏度检测
4.2.6 人工添加稻曲病菌厚垣孢子的土壤灵敏度检测
4.2.7 田间自然发病不同形态稻曲球的LAMP检测
4.2.8 稻田土壤中稻曲病菌的LAMP检测
4.3 本章小结
第五章 结论与讨论
5.1 结论
5.1.1 东北三省水稻纹枯病原菌种类及融合群的鉴定
5.1.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）LAMP检测体系的建立与应用
5.1.3 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）LAMP检测体系的建立与应用
5.2 讨论
5.2.1 东北三省稻区水稻纹枯病原菌种类及融合群鉴定
5.2.2 水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani AG1-IA）LAMP检测体系
5.2.3 稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）LAMP检测体系
参考文献
致谢
攻读学位期间发表文章
本文编号：3150625
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