鸡卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制研究
发布时间：2021-08-11 07:23
鸡的卵泡发育是一个非常复杂、高度协调的生理过程,而在卵泡的整个生长发育过程当中伴随着血管系统的增殖和衰退。作为卵巢组织中含量最丰富,功能最强大的促血管生成因子,血管内皮生长因子（VEGF）能够促进血管新生和提高血管的通透性,对维持卵巢功能及卵泡发育起重要的作用。本实验室前期通过高通量测序,发现miR-26a-5p在鸡性成熟前后的卵巢组织中差异表达,且在鸡等级卵泡膜细胞中过表达miR-26a-5p筛选出许多与血管发育相关的差异基因,推测miR-26a-5p可能参与鸡卵泡血管的发育调控。本研究对鸡等级卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制进行了分析,结果如下:1.转录组测序方法揭示鸡卵泡颗粒细胞中受miR-26a-5p调控的基因。在鸡等级卵泡的颗粒细胞中过表达miR-26a-5p并进行转录组测序,以未过表达miR-26a-5p的颗粒细胞为对照,在过表达miR-26a-5p的等级卵泡颗粒细胞中共筛选出了686个差异表达基因,其中326个显著上调,360个显著下调。生物信息学分析发现差异表达基因多富集在apelin signaling pathway、TGF-βsign...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鸡不同发育时期的各级卵泡（李琴,2018）
鸡卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制研究10转导通路中的主要转录因子TCF/LEF相结合，最后激活与细胞生存、增殖和分化等相关联的靶基因的表达（Amerongenetal.,2009;MacDonaldetal.,2009）。图1.2经典Wnt/β-catenin信号通路简易图（许兵，2011）Fig1.2SimplediagramofclassicalWnt/β-Cateninsignalpath（XuBing,2011）1.5.2β-catenin在卵泡发育中的作用β-catenin又名CTNNB1基因，与α-catenin、γ-catenin组成连环蛋白家族。β-catenin是一种相对分子质量为8.8×104的蛋白分子，其中含有一个可防止蛋白水解的棒状超螺旋结构，在细胞的信号转导过程当中具有极其重要的作用。β-catenin在细胞质中含量最多，在细胞膜和细胞核中也有少量存在（Liuetal.,2009）。β-catenin作为一种重要的调节因子在卵泡发育等方面有重要的作用。同日龄已开产的济宁百日鸡卵巢组织中β-catenin的表达量显著上调（Wangetal.,2009），而敲除β-catenin的小鼠卵泡颗粒细胞CYP19A1及雌激素的产生减弱（Hernandezetal.,2009），结果说明β-catenin参与卵巢卵泡的发育且促进卵巢激素的生成。FSH与β-catenin在牛体内协同调控颗粒细胞中激素的形成，雌激素高的卵泡中β-catenin表达量也随之升高（Castanonetal.,2012），在台湾红宇母鸡中高产母鸡相比低产母鸡中β-catenin的表达量显著上调（Chenetal.,2007），结果说明β-catenin促进性激素的形成且有利于提高母鸡的产蛋率。在鸡体内，β-catenin促进雌激素的形成从而有利于母鸡输卵管的发育（Baeetal.,2014）。以上研究均表明β-catenin参与卵巢卵泡激素的生成从而有利于卵泡的发育成熟。
鸡卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制研究1820s38个循环。熔解曲线：95℃1s；62℃15s；95℃1s。GAPDH用作内参基因来分析试验结果。按照实时荧光定量PCR引物设计原则，用DNAMAN6.0软件设计定量PCR引物，引物在青岛睿博兴科生物技术有限公司合成。2.2.3miR-26a-5p过表达颗粒细胞前后差异表达基因的筛选与验证2.2.3.1RNA-seq测序的样品准备将miR-26a-5pmimic和阴性对照NC转染至颗粒细胞48h后提取总RNA，具体的操作步骤见2.2.2.1。等提取完毕后，检测RNA的质量和浓度。2.2.3.2转录组测序将提取符合标准的RNA样本进行测序，试验流程按照Illumina公司提供的标准操作流程执行，试验流程见图2.1。图2.1转录组试验流程图（北京诺禾致源公司）Fig2.1Theworkflowoftranscription（NovogeneTechnologies）
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA对哺乳动物卵泡发育的影响[J]. 李琴. 畜牧兽医学报. 2018(12)
[2]miR-375通过靶向NLK影响鼻咽癌的增殖及迁移[J]. 李彩红,汪建,徐夏. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2018(03)
[3]BMP9/ALK1/Endoglin信号通路参与调节血管形成与稳态维持[J]. 王淑娟,米立志. 中国科学:生命科学. 2018(06)
[4]miRNA调控家禽卵泡发育的研究进展[J]. 吴艳,皮劲松,潘爱銮,蒲跃进,申杰,张昊,梁振华,孙静,杜金平. 中国家禽. 2018(09)
[5]山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织转录组分析[J]. 朱志明,陈红萍,林如龙,缪中纬,辛清武,李丽,张丹青,郑嫩珠. 中国农业科学. 2016(05)
[6]Nemo样激酶在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义[J]. 彭琛,王迪,郭丰. 南通大学学报(医学版). 2015(05)
[7]Apelin经Akt/AMPK信号通路促进心肌微血管内皮细胞血管生成[J]. 张普,刘铭雅,朱伟,杨宵曼,魏盟. 国际心血管病杂志. 2013(01)
[8]Notch信号途径在血管形成和内皮细胞中的作用[J]. 王莉,刘向东,赵星成,韩骅. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(08)
[9]MicroRNAs在血管新生及其疾病中的作用[J]. 米雪楠,范婧尧,陈宇,惠汝太,张伟丽. 中国医学前沿杂志(电子版). 2012(04)
[10]冠心病患者血浆循环miR-126的表达及其对血管内皮细胞的影响[J]. 郑志伟,劳海燕,余细勇,陈纪言,林秋雄,麦丽萍,钟诗龙. 中国病理生理杂志. 2011(12)
博士论文
[1]鸡繁殖性状相关基因功能分析及卵巢转录组和miRNAs鉴定[D]. 曹顶国.甘肃农业大学 2013
[2]Apelin在多囊卵巢综合征中表达及对颗粒细胞作用机制的初步探讨[D]. 罗爽.重庆医科大学 2012
[3]局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究[D]. 林金杏.浙江大学 2011
硕士论文
[1]miR-458b-5p调控基因CTNNB1对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响[D]. 张深.山东农业大学 2019
[2]miR-26a-5p在鸡卵泡细胞中的表达、作用及其调控分析[D]. 吴海珍.山东农业大学 2018
本文编号：3335738
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鸡不同发育时期的各级卵泡（李琴,2018）
鸡卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制研究10转导通路中的主要转录因子TCF/LEF相结合，最后激活与细胞生存、增殖和分化等相关联的靶基因的表达（Amerongenetal.,2009;MacDonaldetal.,2009）。图1.2经典Wnt/β-catenin信号通路简易图（许兵，2011）Fig1.2SimplediagramofclassicalWnt/β-Cateninsignalpath（XuBing,2011）1.5.2β-catenin在卵泡发育中的作用β-catenin又名CTNNB1基因，与α-catenin、γ-catenin组成连环蛋白家族。β-catenin是一种相对分子质量为8.8×104的蛋白分子，其中含有一个可防止蛋白水解的棒状超螺旋结构，在细胞的信号转导过程当中具有极其重要的作用。β-catenin在细胞质中含量最多，在细胞膜和细胞核中也有少量存在（Liuetal.,2009）。β-catenin作为一种重要的调节因子在卵泡发育等方面有重要的作用。同日龄已开产的济宁百日鸡卵巢组织中β-catenin的表达量显著上调（Wangetal.,2009），而敲除β-catenin的小鼠卵泡颗粒细胞CYP19A1及雌激素的产生减弱（Hernandezetal.,2009），结果说明β-catenin参与卵巢卵泡的发育且促进卵巢激素的生成。FSH与β-catenin在牛体内协同调控颗粒细胞中激素的形成，雌激素高的卵泡中β-catenin表达量也随之升高（Castanonetal.,2012），在台湾红宇母鸡中高产母鸡相比低产母鸡中β-catenin的表达量显著上调（Chenetal.,2007），结果说明β-catenin促进性激素的形成且有利于提高母鸡的产蛋率。在鸡体内，β-catenin促进雌激素的形成从而有利于母鸡输卵管的发育（Baeetal.,2014）。以上研究均表明β-catenin参与卵巢卵泡激素的生成从而有利于卵泡的发育成熟。
鸡卵泡颗粒细胞中miR-26a-5p调控VEGFA表达的分子机制研究1820s38个循环。熔解曲线：95℃1s；62℃15s；95℃1s。GAPDH用作内参基因来分析试验结果。按照实时荧光定量PCR引物设计原则，用DNAMAN6.0软件设计定量PCR引物，引物在青岛睿博兴科生物技术有限公司合成。2.2.3miR-26a-5p过表达颗粒细胞前后差异表达基因的筛选与验证2.2.3.1RNA-seq测序的样品准备将miR-26a-5pmimic和阴性对照NC转染至颗粒细胞48h后提取总RNA，具体的操作步骤见2.2.2.1。等提取完毕后，检测RNA的质量和浓度。2.2.3.2转录组测序将提取符合标准的RNA样本进行测序，试验流程按照Illumina公司提供的标准操作流程执行，试验流程见图2.1。图2.1转录组试验流程图（北京诺禾致源公司）Fig2.1Theworkflowoftranscription（NovogeneTechnologies）
【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA对哺乳动物卵泡发育的影响[J]. 李琴. 畜牧兽医学报. 2018(12)
[2]miR-375通过靶向NLK影响鼻咽癌的增殖及迁移[J]. 李彩红,汪建,徐夏. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志. 2018(03)
[3]BMP9/ALK1/Endoglin信号通路参与调节血管形成与稳态维持[J]. 王淑娟,米立志. 中国科学:生命科学. 2018(06)
[4]miRNA调控家禽卵泡发育的研究进展[J]. 吴艳,皮劲松,潘爱銮,蒲跃进,申杰,张昊,梁振华,孙静,杜金平. 中国家禽. 2018(09)
[5]山麻鸭开产期和产蛋高峰期卵巢组织转录组分析[J]. 朱志明,陈红萍,林如龙,缪中纬,辛清武,李丽,张丹青,郑嫩珠. 中国农业科学. 2016(05)
[6]Nemo样激酶在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义[J]. 彭琛,王迪,郭丰. 南通大学学报(医学版). 2015(05)
[7]Apelin经Akt/AMPK信号通路促进心肌微血管内皮细胞血管生成[J]. 张普,刘铭雅,朱伟,杨宵曼,魏盟. 国际心血管病杂志. 2013(01)
[8]Notch信号途径在血管形成和内皮细胞中的作用[J]. 王莉,刘向东,赵星成,韩骅. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(08)
[9]MicroRNAs在血管新生及其疾病中的作用[J]. 米雪楠,范婧尧,陈宇,惠汝太,张伟丽. 中国医学前沿杂志(电子版). 2012(04)
[10]冠心病患者血浆循环miR-126的表达及其对血管内皮细胞的影响[J]. 郑志伟,劳海燕,余细勇,陈纪言,林秋雄,麦丽萍,钟诗龙. 中国病理生理杂志. 2011(12)
博士论文
[1]鸡繁殖性状相关基因功能分析及卵巢转录组和miRNAs鉴定[D]. 曹顶国.甘肃农业大学 2013
[2]Apelin在多囊卵巢综合征中表达及对颗粒细胞作用机制的初步探讨[D]. 罗爽.重庆医科大学 2012
[3]局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究[D]. 林金杏.浙江大学 2011
硕士论文
[1]miR-458b-5p调控基因CTNNB1对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响[D]. 张深.山东农业大学 2019
[2]miR-26a-5p在鸡卵泡细胞中的表达、作用及其调控分析[D]. 吴海珍.山东农业大学 2018
本文编号：3335738
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