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红花黄酮醇苷生物合成关键酶的功能鉴定及生物催化

发布时间:2021-08-16 12:18
  红花为菊科红花属植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花冠,是我国传统中药,具有抗肿瘤、抗氧化和抗炎等药理作用。黄酮醇及其糖苷类化合物是红花的主要活性成分之一。为探讨红花中黄酮醇苷的生物合成途径,本研究对红花黄酮醇苷代谢途径中的关键酶如黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)、黄酮醇合酶(flavonol synthase,FLS)及糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)进行了挖掘并对其催化特性进行了系统性研究。研究结果如下:成功从红花中寻找并克隆了黄烷酮3-羟化酶(CtF3H)基因、黄酮醇合酶(CtFLS)基因及糖基转移酶(UGT88B2)基因,并在大肠杆菌中实现了基因的外源表达。红花黄烷酮3-羟化酶(CtF3H)能够催化黄烷酮类化合物的C-3位羟基化,生成二氢黄酮醇。选择多对手性异构体的黄烷酮类化合物对CtF3H的催化特点进行了考察,体外酶促反应结果表明:重组酶CtF3H可专一性识别S构型的多个黄烷酮类底物包括(2S)-柚皮素、(2S)-圣草酚、(2S)-甘草素、(2S)-橙皮素和(2S)-杜鹃素,高效... 

【文章来源】:中央民族大学北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】:122 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

红花黄酮醇苷生物合成关键酶的功能鉴定及生物催化


图1-3植物黄酮醇苷生物合成途径示意图??Figure?1-3?Biosynthetic?pathway?of?flavonol?glucosides?in?plants??1.3-酶F3H

技术路线图,课题研究,技术路线,黄烷


红花新鲜花瓣??转录组测序???I???RNA的提取??1??f黄烷113-羟化酶、黄酮醇合酶、'??糖基转移酶丨j选基因的克隆??1??蛋白的表达纯化??—酶功^表征丨 ̄>丨产物结构鉴定1??酶学性T质测定1?丨构建£程菌1??j?:条件优化??pS?pS?|制备活A化合物??最?s舍??适?S属??i皿???网??度?pH?子??图1-10本课题研究的技术路线??Figure?1-10?The?technical?route?of?this?study??13??

氨基酸序列,琼脂糖,凝胶电泳,基因


M?1??■5:;1??100(1?IBS??图2-2红花花瓣总RNA提取的琼脂糖凝胶电泳图.Marker:?I'm瓜5KDNAmarker.??Figure?2-2?Agarose?gel?electrophoresis?of?total?RNA?extraction?from?safflower?petals.?Marker:?Trans?5K?DNA??marker.??3.2?OFJ//基因的扩增与载体构建??基因全长扩増的琼脂糖凝胶电泳检测结果见图2-3,条带大小符合其开放阅读框??(Open?Reading?Frame,?ORF)的基因长度(1086?bp)。??M?1??bp?HjjH??id??图2-3?CVFJ//基因全长扩增的琼脂糖凝胶电泳检测结果.1:QF3H;?Marker:?7hww5KDNAmarker??Figure?2-3.?CtF3H?gene?full-length?amplified?agarose?gel?electrophoresis?detection?results.??3.3?2-酮戊二酸依赖的双加氧酶基因的生物信息学分析??通过MEGA7.0软件分析己报道的其他植物来源的类黄酮生物合成途径中的2-酮戊二??酸依赖的双加氧酶的氨基酸序列(黄烷酮3-羟化酶F3H,黄酮醇合酶FLS,黄酮合酶ANS,??花青素合酶ANS)之间的进化关系,建立Neighbor-Joinning?Tree系统进化树(图2-4)。进??化树分析表明,来源于植物的2-酮戊二酸依赖的双加氧酶(F3H,FLS,FNS,ANS)不同家族??之间的亲缘关系距离较远,但每个家族内基因的同源性相对较高,进化关

【参考文献】:
期刊论文
[1]Enzymatic biosynthesis of benzylisoquinoline alkaloid glycosides via promiscuous glycosyltransferases from Carthamus tinctorius[J]. Yujiao Zhang,Kebo Xie,Aijing Liu,Ridao Chen,Dawei Chen,Lin Yang,Jungui Dai.  Chinese Chemical Letters. 2019(02)
[2]黄酮类化合物合成途径及合成生物学研究进展[J]. 邹丽秋,王彩霞,匡雪君,李滢,孙超.  中国中药杂志. 2016(22)
[3]红花药理作用及其开发与应用研究进展[J]. 易善勇,官丽莉,杨晶,李海燕,李校堃,姜潮,黄建.  北方园艺. 2015(05)
[4]珍珠菜中黄酮苷类成分研究[J]. 梁东,刘彦飞,郝志友,罗桓,王艳,张春磊,张庆建,陈若芸,于德泉.  中国中药杂志. 2015(01)
[5]红花的化学成分及其药理活性研究进展[J]. 扈晓佳,殷莎,袁婷婷,王玉珏,黄珍茹,陆阳.  药学实践杂志. 2013(03)
[6]红花的化学成分及药理作用研究进展[J]. 徐如英,童树洪.  中国药业. 2010(20)
[7]油菜花粉的化学成分研究[J]. 郭娟丽,张培成,张智武.  中国中药杂志. 2009(10)
[8]生物催化与生物转化的研究进展[J]. 卢定强,韦萍,周华,贾红华,欧阳平凯.  化工进展. 2004(06)

硕士论文
[1]红花化学成分研究与活性评价[D]. 乐世俊.南京中医药大学 2015



本文编号:3345658

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