猪TTV1-ORF1和TTV2-ORF1基因的克

发布时间：2021-10-09 11:54

　　Torque teno virus（TTV）是日本科学家Nishizawa等在1997年运用代表性差异分析（Representational difference analysis,RDA）技术从不明原因的输血后肝炎患者血清中发现的一种新的环状单链DNA病毒,又名输血传播病毒、细环病毒。国内外学者先后在世界各地进行了不同动物源的TTV流行病学调查及病原学研究,发现TTV1和TTV2是仔猪多系统衰竭综合征的潜在致病病毒,ORF1可能编码该病毒的核衣壳蛋白。目前国内外通常采用PCR方法检测该病毒,该方法虽具有准确性高的优点,但难以快速广泛应用于各养殖场。血清ELISA的检测方法可以快速批量进行动物疾病的流行病调查。因此,本研究通过巢式PCR方法扩增获得猪TTV1-ORF1和TTV2-ORF1全长基因,分别克隆至克隆载体p EASY-T1,验证正确后,利用生物信息学软件及在线分析软件对测序结果进行生物信息学分析,将验证正确的猪TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ亚克隆至表达载体p EASY-E1,使用工程菌菌株Transetta（DE3）、菌株BL21（DE）,Trans1-T... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英语字母缩写和中英文全称对照表
前言
第一章 文献综述
    1.1研究进展
        1.1.1 TTV的结构与基因组成
        1.1.2 TTV的蛋白质
        1.1.3 TTV的种类
        1.1.4 TTV的复制机制
    1.2流行分布
        1.2.1 流行范围
        1.2.2 传播途径
    1.3致病机理
        1.3.1 TTV的靶器官及靶细胞
        1.3.2 TTV的共生性
        1.3.3 TTV的潜在致病性
        1.3.4 TTV与免疫
    1.4 TTV检测方法的标准化
    1.5 研究趋势
        1.5.1 TTV作为潜在的水质监测指标
        1.5.2 TTV作为潜在的药物载体
        1.5.3 猪TTV作为猪源产品加工过程的检测指标
        1.5.4 猪TTV的间接ELISA检测试剂盒及基因工程疫苗的开发
第二章 猪TTV1-ORF1-XJ、TTV2-ORF1-XJ基因的克隆
    2.1 材料
        2.1.1 样本
        2.1.2 试剂和器材
    2.2 方法
        2.2.1检测引物设计
        2.2.2 目的基因扩增引物设计
        2.2.3 总DNA的提取
        2.2.4 目的片段的扩增
        2.2.5 回收纯化DNA片段
        2.2.6 目的基因的克隆
        2.2.7 转化
        2.2.8 质粒提取
        2.2.9 PCR鉴定克隆产物
    2.3 结果
        2.3.1 样品的PCR检测结果
        2.3.2 巢式PCR法扩增TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的结果
        2.3.3猪源TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的克隆
        2.3.4 重组克隆载体测序结果
        2.3.5 BLAST比对结果
    2.4 讨论
第三章 猪TTV-ORF1生物信息学分析
    3.1 主要方法
    3.2结果
        3.2.1 同源性比对
        3.2.2预测翻译蛋白
        3.2.3 预测蛋白理化性质
        3.2.4 蛋白结构预测分析
        3.2.5 二级结构预测
    3.3 讨论
        3.3.1 同源性
        3.3.2 预测翻译蛋白
        3.3.3 预测蛋白理化性质
        3.3.4 蛋白结构预测分析
        3.3.5 二级结构预测
第四章 TTV-ORF1重组表达质粒的构建与鉴定
    4.1 材料与主要试剂
        4.1.1样本
        4.1.2 主要试剂
    4.2 方法
        4.2.1 目的基因与表达载体的连接
        4.2.2 转化
        4.2.3 PCR鉴定后提取质粒
        4.2.4 PCR鉴定结果
    4.3 结果
        4.3.1 重组表达载体鉴定鉴定结果
    4.4 讨论
第五章 猪TTV1-ORF1-XJ和TTV2-ORF1-XJ基因的原核表达
    5.1 材料与试剂
        5.1.1 菌株
        5.1.2 SDS提取DNA时所用的“SDS提取缓冲液”
        5.1.3 Western Blot试剂配制
    5.2 主要方法
        5.2.1 SDS-PAGE操作方法
        5.2.2重组蛋白的诱导表达
        5.2.3 表达条件的筛选
            5.2.3.1 诱导时间的筛选
            5.2.3.2 诱导温度的筛选
            5.2.3.3 IPTG诱导浓度的筛选
        5.2.4 表达感受态选择
        5.2.5 重组蛋白的可溶性检测
        5.2.6 Western Blot检测
    5.3结果
        5.3.1 相同温度不同浓度下诱导结果
        5.3.2 相同浓度不同温度诱导结果
        5.3.3 Western Blot检测诱导结果
    5.4 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者简介
石河子大学硕士研究生学位论文


【参考文献】：
期刊论文
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[2]猪TTV2 ORF1基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 张文文,王小敏,肖琦,周忠涛,汪伟,温立斌,李彬,郭容利,张雪寒,周俊明,倪艳秀,吕立新,俞正玉,茅爱华,胡屹屹,刘永杰,何孔旺.  江苏农业学报. 2014(01)
[3]猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化[J]. 王小敏,何孔旺,张文文,王东田,周忠涛,张雪寒,周俊明,汪伟,倪艳秀,温立斌.  华北农学报. 2013(05)
[4]华南地区猪输血传播病毒流行病学调查与分析[J]. 南文金,娄高明,黄健强,冯顺胜.  河南农业科学. 2011(12)
[5]2009年我国部分猪群输血传播病毒感染情况调查[J]. 訾占超,夏应菊,韩雪,汪葆玥,遇秀玲,翟新验,田克恭,倪建强.  中国预防兽医学报. 2011(10)
[6]我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析[J]. 王礞礞,周艳君,陈宗艳,于海,李国新,阎丽萍,姜一峰,侯军委,童光志.  中国预防兽医学报. 2009(10)
[7]TTV病毒ORF1抗原的基因克隆及原核表达[J]. 李一冬,唐琳,丁力,赵新合,赵国强.  河南职工医学院学报. 2005(06)



本文编号：3426322