褪黑激素（MEL）在鹅颗粒细胞中的抗氧化作用研究

发布时间：2021-10-14 16:23

　　褪黑激素（melatonin, MEL）是一种生物体内强有效的天然抗氧化剂,不仅自身可以清除自由基,而且还可以增强体内抗氧化酶的作用,减轻活性氧对机体的损害。目前对于MEL抗氧化功能的研究多集中于哺乳动物的卵母细胞,而对于同样在卵泡发育过程中起着重要作用的颗粒细胞研究较少,尤其在鸟类上这方面相关的报道还未曾见到。本研究以天府肉鹅母系母鹅为试验材料,研究了鹅卵泡卵黄内MEL的含量和不同等级卵泡颗粒层细胞中抗氧化酶（SOD1、GPx1、CAT）的表达量,探讨MEL在卵泡发育过程中的抗氧化作用。同时以鹅的颗粒细胞为模型,初步探讨了MEL在鹅颗粒细胞中的抗氧化作用,再用H2O2模拟氧化应激对颗粒细胞造成损伤,最后对H202诱导的颗粒细胞进行MEL预处理,进一步研究MEL可以缓解H2O2对颗粒细胞造成的凋亡,从而验证MEL在鹅颗粒细胞中的抗氧化作用。主要研究结果如下：（1）测了鹅等级卵泡卵黄中MEL的含量,发现随着卵泡的发育成熟,MEL的含量呈现递增的趋势,在F1卵泡内达到最大值8.865 pg/ml,等级卵泡内的MEL均高于血浆（5.811 pg/ml）,表明MEL在卵泡的发育过程中起着重要作... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号说明
前言
1. 文献综述
    1.1 褪黑激素的发现
    1.2 褪黑激素的生物合成、代谢与分布
        1.2.1 褪黑激素的生物合成
        1.2.2 褪黑激素的代谢
        1.2.3 褪黑激素的分布
    1.3 褪黑激素的受体
    1.4 褪黑激素的抗氧化功能
        1.4.1 褪黑激素清除自由基
        1.4.2 褪黑激素对抗氧化酶和促氧化酶的作用
        1.4.3 褪黑激素增强线粒体的功能
    1.5 排卵引起氧化应激
    1.6 褪黑激素能够缓解卵泡内的氧化应激
    1.7 颗粒细胞在卵泡发育过程中的作用
    1.8 本试验目的及意义
2. 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物的挑选
        2.1.2 组织样品的采集
        2.1.3 颗粒细胞的培养
        2.1.4 主要试剂与试剂盒
        2.1.5 主要试剂配制
        2.1.6 主要试验器材与软件
    2.2 试验方法
        2.2.1 组织cDNA的准备
        2.2.2 血浆及卵黄内MEL含量的测定
        2.2.3 实时荧光定量基因表达检测
        2.2.4 鹅原代颗粒细胞的培养
        2.2.5 MEL、H_2O_2处理鹅颗粒细胞及最适浓度的筛选
        2.2.6 MEL、H_2O_2共同处理颗粒细胞
    2.3 数据处理与分析
3. 结果与分析
    3.1 鹅组织RNA的提取
    3.2 鹅等级前卵泡和等级卵泡卵黄中MEL含量水平
    3.3 鹅等级卵泡颗粒层中抗氧化酶的基因表达
    3.4 MEL对鹅颗粒细胞氧化相关指标的影响
        3.4.1 MEL对细胞活性的影响
        3.4.2 MEL对细胞内ROS含量的影响
        3.4.3 MEL对细胞内抗氧化、凋亡等相关基因表达的影响
        3.4.4 MEL对细胞内抗氧化相关蛋白表达的影响
    3.5 氧化应激模型的建立
        3.5.1 H_2O_2对细胞活性的影响
        3.5.2 H_2O_2对细胞内抗氧化、凋亡等相关基因表达的影响
        3.5.3 H_2O_2对细胞内抗氧化等相关蛋白表达的影响
    3.6 MEL对氧化应激状态下鹅颗粒细胞相关氧化指标的影响
        3.6.1 MEL对氧化应激状态下鹅颗粒细胞活性的影响
        3.6.2 MEL对氧化应激状态下鹅颗粒细胞内ROS含量的影响
        3.6.3 MEL对氧化应激状态下鹅颗粒细胞凋亡的影响
        3.6.4 MEL对氧化应激状态下鹅颗粒细胞内抗氧化、凋亡等相关基因表达的影响
4. 讨论
    4.1 褪黑激素及抗氧化酶均表达于卵泡发育进程
    4.2 褪黑激素促进鹅颗粒细胞的发育
    4.3 MEL能够缓解氧化应激引起颗粒细胞的凋亡
5. 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Ghrelin对鸡等级前卵泡发育的影响[J]. 林金杏,毛赟杰,米玉玲,张才乔.  畜牧兽医学报. 2011(09)
[2]前列腺素对禽类等级卵泡发育的影响[J]. 金艳梅.  中国畜牧兽医. 2010(04)
[3]褪黑激素对受损伤脑神经元的保护作用与bcl-2蛋白过度表达有关（英文）[J]. 凌祥,张玲妹,陆世铎,李学君,孙凤艳.  Acta Pharmacologica Sinica. 1999(05)

博士论文
[1]褪黑素对H2O2诱导的大鼠脑微血管周细胞损伤的影响[D]. 鹿文葆.北京协和医学院 2012



本文编号：3436468