双链RNA介导的烟草抗病毒病（TMV,CMV,PVY）和靶斑病（Rhizoctonia solani）的研究

发布时间：2022-02-20 22:48

　　随着分子生物学技术的发展,RNA干扰（RNA interference,RNAi）成为了有效防治植物病害的新方法。本研究通过病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）体系分别筛选出抑制烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）和烟草靶斑病菌最有效的靶点,然后体外转录同时靶向这三种病毒最有效靶点的双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）,以及靶向烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）有效靶点的dsRNA,并将它们应用到烟草植株上,通过RT-qPCR（Real time quantitative RT-PCR）分别检测它们对这三种烟草病毒病和靶斑病的抑制效果,主要研究成果如下:1.以TMV、CMV、PVY多个核酸序列作为沉默靶点,分别构建了VIGS载体并检测了其沉默效果。本研究以烟草脆裂病毒（TRV）为载体,选取TMV的p126、p183、MP、CP、3’UTR的核... 

【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1.1 双链RNA和 RNA干扰的研究进展
        1.1.1 双链RNA的形成与RNA干扰的发现
        1.1.2 RNA干扰的作用机制与特点
        1.1.3 RNA干扰在植物抗病研究方面的应用
        1.1.4 植物病毒载体在RNA干扰方面的应用
    1.2 三种重要烟草病毒病的研究进展
        1.2.1 烟草花叶病毒(TMV)的研究进展
        1.2.2 黄瓜花叶病毒(CMV)的研究进展
        1.2.3 马铃薯Y病毒(PVY)的研究进展
        1.2.4 烟草病毒病的防治现状
    1.3 烟草靶斑病的研究进展
        1.3.1 病害发生情况
        1.3.2 危害症状
        1.3.3 病原菌
        1.3.4 重要致病基因
        1.3.5 烟草靶斑病的防治现状
第二章 三种病毒靶标序列的获得及VIGS载体的构建
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 TMV,CMV和 PVY诱导的VIGS体系的建立及沉默检测
        2.1.3 TMV-p126,CMV-2a和 PVY-HC-pro核酸片段融合VIGS载体的构建及基因沉默效果检测
    2.2 结果与分析
        2.2.1 TMV,CMV和 PVY诱导的VIGS体系的建立及沉默效果分析
        2.2.2 核酸序列融合的VIGS沉默效果及分析
    2.3 小结
第三章 烟草靶斑病菌靶标序列的获得及VIGS体系的建立
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 RPMK1 基因和endoPGs基因的获得
        3.2.2 pTRV-RPMK1和pTRV-endoPGs重组表达载体转入大肠杆菌
        3.2.3 TRV-RPMK1和TRV-endoPGs诱导的VIGS体系的沉默效果及分析
    3.3 小结
第四章 双链RNA的表达及抗病性的初步分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 三种病毒序列和烟草靶斑病菌基因序列的dsRNA的表达
        4.1.3 外源dsRNA的应用
    4.2 结果与分析
        4.2.1 载体pT-3FF的菌落PCR鉴定
        4.2.2 表达dsRNA-3FF,dsRNA-RPMK1,dsRNA-endoPGs和 dsRNA-GFP的模板制备
        4.2.3 dsRNA-3FF,dsRNA-RPMK1,dsRNA-endoPGs和 dsRNA-GFP的表达
        4.2.4 外源dsRNA-3FF对三种病毒的抑制效果分析
        4.2.5 外源dsRNA-RPMK1和dsRNA-endoPGs对靶斑病菌的抑制效果分析
    4.3 小结
第五章 结论与讨论
    5.1 病毒诱导的基因沉默(VIGS)对 TMV,CMV和 PVY的抑制效果
    5.2 病毒诱导的基因沉默(VIGS)对烟草靶斑病的抑制效果
    5.3 外源dsRNA抗三种烟草病毒(TMV,CMV和 PVY)和烟草靶斑病菌
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]“RNAi农药”防治植物病毒病的研究进展[J]. 解昆仑,郭珍,古勤生.  中国植保导刊. 2020(01)
[2]马铃薯病毒病的症状及防治措施[J]. 祖英治.  现代畜牧科技. 2019(10)
[3]纳米材料结合的dsRNA对烟草花叶病毒侵染的抑制[J]. 王嘉琪,刘勇,张松柏,朱春晖,孙书娥,张德咏.  中国生物防治学报. 2018(05)
[4]水稻纹枯病菌MAPK级联信号途径分析及信号通路模型预测[J]. 杨系玲,姜述君,马婧,戴凌燕,邓本良,孔祥森,范文艳.  中国农业科技导报. 2017(12)
[5]广西烟草立枯病菌和靶斑病菌菌丝融合群初步分析[J]. 陈媛媛,谭海文,卢燕回,黎起秦,林纬,袁高庆.  广东农业科学. 2016(10)
[6]RNA干扰的机制及其应用[J]. 尚仁福,吴立刚.  生命科学. 2016(05)
[7]东北地区烟草靶斑病菌（Rhizoctonia solani）融合群、致病力分化及品种抗病性研究[J]. 苏燕妮,董雪,赵艳琴,孙宏伟,孙剑萍,吴元华.  植物保护. 2016(01)
[8]防治烟草靶斑病药剂的筛选[J]. 王潮钟,黄翯,董雪,苏燕妮.  河南农业科学. 2016(01)
[9]原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究[J]. 张涛,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏.  热带作物学报. 2014(07)
[10]烟草靶斑病菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因endoPGs的克隆及表达特征分析[J]. 赵艳琴,吴元华,赵秀香,陈建光,伏颖,安梦楠.  中国农业科学. 2014(10)



本文编号：3635963