黄姑鱼经杀香鱼假单胞菌和Poly I:C刺激后的病理特征及免疫相关基因表达特征分析
发布时间：2023-01-15 07:29
黄姑鱼（Nibea albiflora）是我国重要的海水网箱养殖鱼类之一,在浙、闵沿海具有较大的养殖规模。网箱养殖过程中,黄姑鱼容易受大黄鱼等邻网养殖鱼类病原体的感染,给其养殖带来巨大危害。本研究分析了黄姑鱼分别感染杀香鱼假单胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）和Poly I:C后的病理特征和免疫基因应答反应。研究结果如下:1.感染杀香鱼假单胞菌的黄姑鱼有明显的鳍条表面出血、色素沉积、肠道红肿和肠道内黄色液体堆积等病理现象,组织切片显示其肝有明显细胞空泡化、脾有明显的巨噬细胞浸润。而Poly I:C刺激后黄姑鱼的肝与脾组织切片观察未发现明显的病变。2.荧光定量分析结果表明,黄姑鱼感染杀香鱼假单胞菌或注射Poly I:C后,其肝、脾和鳃等组织中icCu/Zn-SOD、MnSOD、ecCu/Zn-SOD、HSP70和HSP90等基因的mRNA表达量显著上调。与对照组相比,Poly I:C刺激后0-72 h内,肝脏、脾脏和鳃中的上述基因的表达量均上调;感染杀香鱼假单胞菌后0-48 h内,肝脏、脾脏和鳃中的上述基因的表达量均上调,感染72 h上述基因在肝中表达量显著下...
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 鱼类的病原体
1.2 鱼类的非特异性免疫
1.2.1 鱼类主要的免疫细胞、组织和免疫器官
1.2.2 鱼机体内的活性氧(ROS)
1.2.3 鱼类的抗氧化系统
1.2.4 Toll样受体介导的级联反应
1.3 鱼类非特异性免疫研究进展
1.3.1 超氧化物歧化酶研究进展
1.3.2 热休克蛋白的研究进展
1.3.3 模式识别受体(PRR)介导的非特异性免疫研究进展
1.4 黄姑鱼及其病原体
1.4.1 黄姑鱼简介
1.4.2 黄姑鱼的病原体
1.5 研究目的
第二章 黄姑鱼病原体感染后的病理变化及抗氧化免疫功能的影响
2.1 材料及方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器与试剂
2.1.3 注射用菌的制备
2.1.4 实验设计
2.1.5 NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90 在各组织表达差异的定量分析
2.1.6 杀香鱼假单胞菌感染和Poly(I:C)刺激后黄姑鱼脾脏、肝脏和鳃中NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90的mRNA的表达变化
2.1.7 杀香鱼假单胞菌感染和Poly(I:C)刺激后肝脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性、NaHSP70和NaHSP90 蛋百含量的测定
2.1.8 数据统计分析
2.2 实验结果
2.2.1 不同浓度的杀香鱼假单胞菌对黄姑鱼的毒理
2.2.2 病理学分析
2.2.3 NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90 在各组织中的表达定量分析
2.2.4 感染后肝脏,脾脏和鳃中NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70 和NaHSP90的定量分析
2.2.5 刺激后肝脏中总SOD酶活性和HSP70,HSP90 蛋白含量的变化
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 黄姑鱼TLR基因分子特征及其在病原体胁迫后的表达分析
3.1 材料及方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器与试剂
3.1.3 实验设计
3.1.4 扩增引物
3.1.5 TLR3、TLR5s和 TLR14 序列分析
3.1.6 RT-PCR和 qRT-PCR
3.2 实验结果
3.2.1 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14的c DNA序列及其结构
3.2.2 TLR3、TLR5s和 TLR14 在黄姑鱼各组织中差异性表达
3.2.3 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14 的时间差异性表达
3.3 讨论
3.3.1 TLR3、TLR5s和 TLR14 的结构分析
3.3.2 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14 组织差异性表达分析
3.3.3 病原体感染后TLR3、TLR5s和 TLR14 差异性表达分析
结论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]天然免疫系统的双链RNA受体及其抗病毒研究进展[J]. 何珊,李双洁,周荣云,朱美芹,朱聪,朱建中. 中国动物传染病学报. 2020(05)
[2]特异性检测珍珠龙胆石斑鱼虹彩病毒病的核酸适配体的筛选与鉴定[J]. 余庆,刘明珠,肖贺贺,易弋,程昊,Putra Dedi-Fazriansyah,黎思巧,李鹏飞. 分析化学. 2020(05)
[3]鲑科鱼类的几种病毒性疾病及其防控措施（4）[J]. 陈昌福,张喜贵,孟长明. 渔业致富指南. 2019(20)
[4]黄姑鱼锰超氧化物歧化酶基因的克隆及氨氮和亚硝态氮胁迫对其表达的影响[J]. 王小龙,宋青,王志勇,韩芳. 水产学报. 2019(04)
[5]RIG-I的基因结构、进化及功能[J]. 李娜,高丽丽,郑康,刘茜,陈美栅,李奥,庞秋香. 中国细胞生物学学报. 2018(10)
[6]天津地区黄姑鱼人工繁殖技术[J]. 逯云召,宓慧菁,于燕光,钱红,王麒麟. 河北渔业. 2018(02)
[7]饲料中添加壳寡糖对花鲈（Lateolabrax japonicus）幼鱼的生长、消化和血清生化指标的影响[J]. 胡晓伟,上官静波,黎中宝,杨敏,徐安乐. 海洋学报. 2018(02)
[8]热休克蛋白的研究进展[J]. 陈明帅,徐超,宋兴超,刘学庆,邢秀梅,赵家平. 经济动物学报. 2016(01)
[9]Toll样受体及其对水生动物疾病调控作用的研究进展[J]. 梁利国,陈凯,谢骏. 江苏农业科学. 2015(05)
[10]鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展[J]. 范泽军,邹鹏飞,姚翠鸾. 水生生物学报. 2015(01)
博士论文
[1]钾离子通道在鲈鱼巨噬细胞中非特异性免疫功能研究[D]. 丛柏林.中国海洋大学 2014
硕士论文
[1]卵形鲳鲹TLR3信号通路相关基因的克隆与表达分析[D]. 胡舒.广西大学 2019
[2]东北七鳃鳗Toll样受体信号通路基因表达研究[D]. 丁少青.上海海洋大学 2018
[3]钾离子通道在星斑川鲽（Platichthys stellatus）先天性免疫防御中旳作用研究[D]. 刘春影.山东大学 2016
[4]环境雌激素双酚A对红鲤鱼（Cyprinus carpio）的免疫毒性及毒理机制研究[D]. 裘文慧.上海大学 2013
[5]哈维氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表达及免疫原性的研究[D]. 辛瑞晓.中国海洋大学 2011
[6]河北省养殖冷水鱼寄生虫病的初步调查和防治研究[D]. 李美英.河北师范大学 2009
[7]单诺沙星对鲤鱼（Cyprinus carpio L.）抗氧化和非特异性免疫功能的影响[D]. 张旭东.中国海洋大学 2008
[8]大黄鱼两株病原弧菌拮抗菌的研究[D]. 郭国军.集美大学 2007
本文编号：3730805
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 鱼类的病原体
1.2 鱼类的非特异性免疫
1.2.1 鱼类主要的免疫细胞、组织和免疫器官
1.2.2 鱼机体内的活性氧(ROS)
1.2.3 鱼类的抗氧化系统
1.2.4 Toll样受体介导的级联反应
1.3 鱼类非特异性免疫研究进展
1.3.1 超氧化物歧化酶研究进展
1.3.2 热休克蛋白的研究进展
1.3.3 模式识别受体(PRR)介导的非特异性免疫研究进展
1.4 黄姑鱼及其病原体
1.4.1 黄姑鱼简介
1.4.2 黄姑鱼的病原体
1.5 研究目的
第二章 黄姑鱼病原体感染后的病理变化及抗氧化免疫功能的影响
2.1 材料及方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器与试剂
2.1.3 注射用菌的制备
2.1.4 实验设计
2.1.5 NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90 在各组织表达差异的定量分析
2.1.6 杀香鱼假单胞菌感染和Poly(I:C)刺激后黄姑鱼脾脏、肝脏和鳃中NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90的mRNA的表达变化
2.1.7 杀香鱼假单胞菌感染和Poly(I:C)刺激后肝脏中总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性、NaHSP70和NaHSP90 蛋百含量的测定
2.1.8 数据统计分析
2.2 实验结果
2.2.1 不同浓度的杀香鱼假单胞菌对黄姑鱼的毒理
2.2.2 病理学分析
2.2.3 NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70和NaHSP90 在各组织中的表达定量分析
2.2.4 感染后肝脏,脾脏和鳃中NaSOD1,NaSOD2,NaSOD3,NaHSP70 和NaHSP90的定量分析
2.2.5 刺激后肝脏中总SOD酶活性和HSP70,HSP90 蛋白含量的变化
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 黄姑鱼TLR基因分子特征及其在病原体胁迫后的表达分析
3.1 材料及方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验仪器与试剂
3.1.3 实验设计
3.1.4 扩增引物
3.1.5 TLR3、TLR5s和 TLR14 序列分析
3.1.6 RT-PCR和 qRT-PCR
3.2 实验结果
3.2.1 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14的c DNA序列及其结构
3.2.2 TLR3、TLR5s和 TLR14 在黄姑鱼各组织中差异性表达
3.2.3 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14 的时间差异性表达
3.3 讨论
3.3.1 TLR3、TLR5s和 TLR14 的结构分析
3.3.2 黄姑鱼TLR3、TLR5s和 TLR14 组织差异性表达分析
3.3.3 病原体感染后TLR3、TLR5s和 TLR14 差异性表达分析
结论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]天然免疫系统的双链RNA受体及其抗病毒研究进展[J]. 何珊,李双洁,周荣云,朱美芹,朱聪,朱建中. 中国动物传染病学报. 2020(05)
[2]特异性检测珍珠龙胆石斑鱼虹彩病毒病的核酸适配体的筛选与鉴定[J]. 余庆,刘明珠,肖贺贺,易弋,程昊,Putra Dedi-Fazriansyah,黎思巧,李鹏飞. 分析化学. 2020(05)
[3]鲑科鱼类的几种病毒性疾病及其防控措施（4）[J]. 陈昌福,张喜贵,孟长明. 渔业致富指南. 2019(20)
[4]黄姑鱼锰超氧化物歧化酶基因的克隆及氨氮和亚硝态氮胁迫对其表达的影响[J]. 王小龙,宋青,王志勇,韩芳. 水产学报. 2019(04)
[5]RIG-I的基因结构、进化及功能[J]. 李娜,高丽丽,郑康,刘茜,陈美栅,李奥,庞秋香. 中国细胞生物学学报. 2018(10)
[6]天津地区黄姑鱼人工繁殖技术[J]. 逯云召,宓慧菁,于燕光,钱红,王麒麟. 河北渔业. 2018(02)
[7]饲料中添加壳寡糖对花鲈（Lateolabrax japonicus）幼鱼的生长、消化和血清生化指标的影响[J]. 胡晓伟,上官静波,黎中宝,杨敏,徐安乐. 海洋学报. 2018(02)
[8]热休克蛋白的研究进展[J]. 陈明帅,徐超,宋兴超,刘学庆,邢秀梅,赵家平. 经济动物学报. 2016(01)
[9]Toll样受体及其对水生动物疾病调控作用的研究进展[J]. 梁利国,陈凯,谢骏. 江苏农业科学. 2015(05)
[10]鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展[J]. 范泽军,邹鹏飞,姚翠鸾. 水生生物学报. 2015(01)
博士论文
[1]钾离子通道在鲈鱼巨噬细胞中非特异性免疫功能研究[D]. 丛柏林.中国海洋大学 2014
硕士论文
[1]卵形鲳鲹TLR3信号通路相关基因的克隆与表达分析[D]. 胡舒.广西大学 2019
[2]东北七鳃鳗Toll样受体信号通路基因表达研究[D]. 丁少青.上海海洋大学 2018
[3]钾离子通道在星斑川鲽（Platichthys stellatus）先天性免疫防御中旳作用研究[D]. 刘春影.山东大学 2016
[4]环境雌激素双酚A对红鲤鱼（Cyprinus carpio）的免疫毒性及毒理机制研究[D]. 裘文慧.上海大学 2013
[5]哈维氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表达及免疫原性的研究[D]. 辛瑞晓.中国海洋大学 2011
[6]河北省养殖冷水鱼寄生虫病的初步调查和防治研究[D]. 李美英.河北师范大学 2009
[7]单诺沙星对鲤鱼（Cyprinus carpio L.）抗氧化和非特异性免疫功能的影响[D]. 张旭东.中国海洋大学 2008
[8]大黄鱼两株病原弧菌拮抗菌的研究[D]. 郭国军.集美大学 2007
本文编号：3730805
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3730805.html
