AcMNPV感染宿主细胞过程中Ac154的功能研究
发布时间：2023-09-03 17:18
苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)是首个完成全基因组测序的病毒,被认为是杆状病毒的模式种。近年来,AcMNPV被广泛用做生物杀虫剂,并被称为安全杀虫剂,但因其杀虫效率较低等局限性从而限制了其作为杀虫剂的广泛使用。近一年来世界十大害虫之一草地贪夜蛾侵入我国,并且预计2020年全面爆发,最先可能遭到迫害的是小麦,其次是玉米等作物。面对如此巨大的粮食安全挑战,需要联合各种防治手段和抗性治理方法,以减少杀虫剂的过度使用,所以寻找一种安全高效的生物杀虫剂刻不容缓。因此,为了提高AcMNPV的抗虫活性,全面了解其基因组中各基因的功能显得尤为重要。AcMNPV基因组中的最后一个开放阅读框AcOrf-154即ac154,基因全长246bp,至今仍无文献报道其在病毒感染过程中发挥的作用。有文献报道在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)中存在ac154的同源基因bm129,敲除此基因获得的重组病毒感染能力增大,但是对其在...
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒
1.1.1 杆状病毒概述
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的结构
1.1.4 杆状病毒的生活周期
1.1.5 杆状病毒基因表达
1.1.6 λ-Red同源重组及其应用
1.2 杆状病毒Ac MNPV的 ac154 基因
1.2.1 ac154 概述
1.2.2 Ac154 生物信息学分析
1.2.3 Ac154 的相关研究进展
1.3 细胞凋亡和杆状病毒感染
1.3.1 杆状病毒p35 基因
1.3.2 草地贪夜蛾Sfp53 基因
1.4 昆虫杆状病毒表达载体系统的研究概况
1.5 论文的设计思路
1.5.1 研究内容与意义
1.5.2 研究方法
1.5.3 实验流程
1.5.4 研究的创新点
第二章 重组杆状病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的构建及Ac154-EGFP的表达分析
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要实验仪器
2.2.2 主要试剂及其配置
2.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 重组病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的构建
2.3.2 Sf9 细胞的培养
2.3.3 噬斑法测定病毒的滴度
2.3.4 荧光定位分析Ac154-EGFP在宿主细胞中的分布
2.3.5 Western blot及荧光显微镜观察分析Ac154-EGFP的表达量
2.4 实验结果
2.4.1 重组杆粒Bacmidac154KO-EGFP的构建
2.4.2 重组杆粒Bacmidac154KO-Ac154-EGFP的构建
2.4.3 重组杆粒Bacmid-Ac154-EGFP的构建
2.4.4 重组病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的获得
2.4.5 荧光显微镜和Western blot检测Ac154-EGFP在 Sf9 细胞中的表达水平.
2.4.6 荧光定位和Western blot检测Ac154-EGFP在 Sf9 细胞核内的积累
2.5 讨论
第三章 Ac154在Ac MNPV侵染宿主细胞过程中的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要实验仪器
3.2.2 主要试剂及其配制
3.2.3 细胞、病毒
3.3 实验方法
3.3.1 Sf9 细胞的培养
3.3.2 病毒生长曲线分析
3.3.3 Real-time PCR检测重组病毒对抗凋亡基因p35 转录水平的影响
3.3.4 MTT实验分析重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响
3.3.5 Western blot分析重组病毒感染Sf9 细胞中SfP53 的表达
3.4 实验结果
3.4.1 重组病毒子代病毒增殖的影响分析
3.4.2 重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响分析
3.4.3 重组病毒侵染过程中抗凋亡基因p35 转录水平的分析
3.4.4 重组病毒感染的Sf9 细胞中SfP53 的表达量分析
3.5 讨论
第四章 AcMNPV p35 基因缺失对Ac154 发挥作用的分析
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要实验仪器
4.2.2 主要试剂及其配置
4.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
4.3 实验方法
4.3.1 重组病毒vAcp35KO-EGFP和 vAcp35KO-Ac154-EGFP的构建
4.3.2 Sf9 细胞的培养
4.3.3 噬斑法测定病毒的滴度
4.3.4 病毒生长曲线分析
4.3.5 MTT实验分析重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响
4.3.6 Western blot分析重组病毒感染Sf9 细胞中SfP53 的表达
4.4 实验结果
4.4.1 重组杆粒Bacmidp35KO-EGFP的构建
4.4.2 重组杆粒Bacmidp35KO-Ac154-EGFP的构建
4.4.3 重组病毒vAcp35KO-EGFP和 vAcp35KO-Ac154-EGFP的获得
4.4.4 重组病毒子代病毒增殖的分析
4.4.5 重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响分析
4.4.6 重组病毒感染的Sf9 细胞中SfP53 的表达量分析
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3845454
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒
1.1.1 杆状病毒概述
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的结构
1.1.4 杆状病毒的生活周期
1.1.5 杆状病毒基因表达
1.1.6 λ-Red同源重组及其应用
1.2 杆状病毒Ac MNPV的 ac154 基因
1.2.1 ac154 概述
1.2.2 Ac154 生物信息学分析
1.2.3 Ac154 的相关研究进展
1.3 细胞凋亡和杆状病毒感染
1.3.1 杆状病毒p35 基因
1.3.2 草地贪夜蛾Sfp53 基因
1.4 昆虫杆状病毒表达载体系统的研究概况
1.5 论文的设计思路
1.5.1 研究内容与意义
1.5.2 研究方法
1.5.3 实验流程
1.5.4 研究的创新点
第二章 重组杆状病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的构建及Ac154-EGFP的表达分析
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 主要实验仪器
2.2.2 主要试剂及其配置
2.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
2.3 实验方法
2.3.1 重组病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的构建
2.3.2 Sf9 细胞的培养
2.3.3 噬斑法测定病毒的滴度
2.3.4 荧光定位分析Ac154-EGFP在宿主细胞中的分布
2.3.5 Western blot及荧光显微镜观察分析Ac154-EGFP的表达量
2.4 实验结果
2.4.1 重组杆粒Bacmidac154KO-EGFP的构建
2.4.2 重组杆粒Bacmidac154KO-Ac154-EGFP的构建
2.4.3 重组杆粒Bacmid-Ac154-EGFP的构建
2.4.4 重组病毒vAcac154KO-EGFP、vAcac154KO-Ac154-EGFP和 vAc-Ac154-EGFP的获得
2.4.5 荧光显微镜和Western blot检测Ac154-EGFP在 Sf9 细胞中的表达水平.
2.4.6 荧光定位和Western blot检测Ac154-EGFP在 Sf9 细胞核内的积累
2.5 讨论
第三章 Ac154在Ac MNPV侵染宿主细胞过程中的功能分析
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 主要实验仪器
3.2.2 主要试剂及其配制
3.2.3 细胞、病毒
3.3 实验方法
3.3.1 Sf9 细胞的培养
3.3.2 病毒生长曲线分析
3.3.3 Real-time PCR检测重组病毒对抗凋亡基因p35 转录水平的影响
3.3.4 MTT实验分析重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响
3.3.5 Western blot分析重组病毒感染Sf9 细胞中SfP53 的表达
3.4 实验结果
3.4.1 重组病毒子代病毒增殖的影响分析
3.4.2 重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响分析
3.4.3 重组病毒侵染过程中抗凋亡基因p35 转录水平的分析
3.4.4 重组病毒感染的Sf9 细胞中SfP53 的表达量分析
3.5 讨论
第四章 AcMNPV p35 基因缺失对Ac154 发挥作用的分析
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 主要实验仪器
4.2.2 主要试剂及其配置
4.2.3 细胞、病毒、菌株及载体
4.3 实验方法
4.3.1 重组病毒vAcp35KO-EGFP和 vAcp35KO-Ac154-EGFP的构建
4.3.2 Sf9 细胞的培养
4.3.3 噬斑法测定病毒的滴度
4.3.4 病毒生长曲线分析
4.3.5 MTT实验分析重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响
4.3.6 Western blot分析重组病毒感染Sf9 细胞中SfP53 的表达
4.4 实验结果
4.4.1 重组杆粒Bacmidp35KO-EGFP的构建
4.4.2 重组杆粒Bacmidp35KO-Ac154-EGFP的构建
4.4.3 重组病毒vAcp35KO-EGFP和 vAcp35KO-Ac154-EGFP的获得
4.4.4 重组病毒子代病毒增殖的分析
4.4.5 重组病毒对Sf9 细胞增殖的影响分析
4.4.6 重组病毒感染的Sf9 细胞中SfP53 的表达量分析
4.5 讨论
总结与展望
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3845454
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