青鱼IRF9基因的分子克隆及功能初探

发布时间：2024-02-15 18:27

　　干扰素调节因子9(IRF9)是JAK-STAT信号传导中的一个重要转录调控蛋白。本次研究首先克隆了青鱼(black carp)的IRF9基因的编码序列(coding sequence,CDS),同时对它的抗病毒功能进行了初步地探究。bcIRF9基因的CDS序列由1287个脱氧核苷酸组成,可以翻译成428个氨基酸;通过ExPASy软件预测到bcIRF9的分子量和等电点分别为48.31 kDa和7.98。其次结构预测了解到bcIRF9在结构进化中保守,主要由N端的DNA结合结构域(位于1-120aa,DBD)、C端的IRF相关结构域(位于216-428aa,IAD)和中间的连接结构域(位于121-215aa,LD)构成。实时定量PCR实验得到:bcIRF9在宿主的肾细胞中转录成mRNA的数量会随着LPS,poly(I:C)和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的刺激而提高。免疫印迹实验表明:在HEK293T细胞和EPC细胞中,构建的bcIRF9真核表达载体能成功表达,而且其条带大小约为54KDa。免疫荧光实验显示:bcIRF9集中位于细胞核。我们通过构建bcIRF9的结构域缺失突变体来探究不同结构域...

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【部分图文】：

图3-1：bcIRF9的序列比对

青鱼IRF9基因的分子克隆及功能初探27第三章实验结果3.1bcIRF9的分子克隆和序列分析为了研究bcIRF9在宿主的抗病毒免疫的功能，本研究克隆了bcIRF9的编码序列（CDS）。bcIRF9的CDS由1287个核苷酸组成，编码428个氨基酸（NCBI登录号：MH410168....

图3-2：脊椎动物IRF家族的进化树

青鱼IRF9基因的分子克隆及功能初探29续表3-1SpeciesFull-lengthsequenceSimilarityIdentityL.crocea58.846.6G.gallus46.233.5H.sapiens47.633.1M.mulatta47.133.6S.scr....

图3-3.bcIRF9在不同刺激下的转录表达

硕士学位论文32图3-3.bcIRF9在不同刺激下的转录表达。用指定浓度的poly（I︰C）或LPS处理细胞，或分别在指定的MOI下用GCRV感染细胞，并在刺激后指定的时间点收细胞来用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

图3-4：Flag-bcIRF9蛋白的表达

硕士学位论文32图3-3.bcIRF9在不同刺激下的转录表达。用指定浓度的poly（I︰C）或LPS处理细胞，或分别在指定的MOI下用GCRV感染细胞，并在刺激后指定的时间点收细胞来用于qPCR。Figure3-3.TranscriptionalexpressionofbcIRF....

本文编号：3900146