鸡CYP27A1对维生素D 3 的羟化功能研究
发布时间：2024-03-01 04:24
CYP27A1是主要存在于肝脏中的一种细胞色素P450酶,是一种功能多样且非常重要的CYP450酶。在人类体内,CYP27A1在维生素D3的C-25位羟化过程以及胆汁酸合成中具有重要作用,是人类生命代谢中非常重要的酶。到目前为止,人们对人类维生素D羟化酶的研究已经比较成熟,但是对禽类的维生素D羟化酶研究还非常有限,维生素D在鸡的产蛋量、蛋壳硬度、骨骼强度以及孵化率等方面具有重要影响。因此研究鸡体内的维生素D羟化酶具有重要意义。经研究分析后发现,鸡体内的CYP27A1与人的CYP27A1同源性较高,且鸡的CYP27A1也是鸡体内源及外源化合物代谢的关键羟化酶,由此推测鸡体内的CYP27A1可能参与维生素D3的代谢。本实验选择以鸡的CYP27A1为研究对象,探究鸡体内的CYP27A1是否对维生素D3具有羟化作用。在本研究中,首先采用了生物信息学软件对鸡的Cyp27a1编码的氨基酸序列进行了分析,对之后鸡Cyp27a1的异源表达研究以及理化性质研究提供参考。其次以鸡Cyp27a1的cDNA序列为模板克隆了鸡Cyp27a1基因的...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 维生素D概述
1.1.1 维生素D的发现
1.1.2 维生素D的代谢与生理功能
1.1.3 维生素D的病理学功能
1.1.4 维生素D对鸡的生理影响
1.2 细胞色素P450酶概述
1.2.1 细胞色素P450
1.2.2 细胞色素P450分布及命名
1.2.3 细胞色素P450代谢与功能
1.2.4 细胞色素P450异源表达研究
1.3 Cyp27a1概述
1.3.1 参与维生素D的 25-羟基化作用的酶
1.3.2 Cyp27a1分布与功能
1.3.3 Cyp27a1的异源表达研究
1.3.4 Cyp27a1的调控因素
1.3.5 Cyp27a1引起的病理学作用
1.4 本研究的目的及意义
第2章 鸡CYP27A1的氨基酸序列分析
2.1 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 理化性质分析
2.2.2 亲疏水性分析
2.2.3 信号肽与跨膜信息分析
2.2.4 亚细胞定位分析
2.2.5 结构域预测
2.2.6 分子功能预测分析
2.2.7 氨基酸序列比对
2.2.8 蛋白质二级结构预测分析
2.2.9 鸡CYP27A1蛋白质三级结构预测
2.3 讨论
第3章 鸡Cyp27a1的真核表达
3.1 实验材料
3.1.1 菌株与细胞
3.1.2 仪器与设备
3.1.3 主要试剂及材料
3.1.4 主要试剂配制方法
3.2 实验方法
3.2.1 Cyp27a1的cDNA的PCR扩增
3.2.2 pcDNATM3.1/myc-His(-)A质粒载体与Cyp27a1 PCR产物酶切
3.2.3 Cyp27a1 PCR片段与pcDNATM3.1/myc-His(-)A载体连接
3.2.4 筛选阳性克隆
3.3 293T细胞培养
3.3.1 细胞复苏
3.3.2 细胞传代
3.3.3 pcDNA-Cyp27a1重组质粒转染 293T细胞
3.4 Western Blotting检测
3.4.1 细胞中蛋白样品的收集
3.4.2 G250测蛋白的标准曲线制作
3.4.3 Western Blot实验
3.5 结果与分析
3.5.1 Cyp27a1的cDNA扩增
3.5.2 Cyp27a1的PCR产物酶切
3.5.3 菌液PCR检测
3.5.4 蛋白标准曲线的制作及蛋白浓度的测定
3.5.5 鸡CYP27A1真核表达蛋白的Western Blot检测
3.6 讨论
第4章 酶活实验
4.1 仪器设备
4.2 试剂及材料
4.3 试剂配制
4.4 实验方法
4.4.1 提取线粒体蛋白
4.4.2 蛋白浓度测定
4.4.3 酶活实验
4.5 鸡CYP27A1的生物活性检测结果及分析
4.6 讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
本文编号：3915415
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 维生素D概述
1.1.1 维生素D的发现
1.1.2 维生素D的代谢与生理功能
1.1.3 维生素D的病理学功能
1.1.4 维生素D对鸡的生理影响
1.2 细胞色素P450酶概述
1.2.1 细胞色素P450
1.2.2 细胞色素P450分布及命名
1.2.3 细胞色素P450代谢与功能
1.2.4 细胞色素P450异源表达研究
1.3 Cyp27a1概述
1.3.1 参与维生素D的 25-羟基化作用的酶
1.3.2 Cyp27a1分布与功能
1.3.3 Cyp27a1的异源表达研究
1.3.4 Cyp27a1的调控因素
1.3.5 Cyp27a1引起的病理学作用
1.4 本研究的目的及意义
第2章 鸡CYP27A1的氨基酸序列分析
2.1 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 理化性质分析
2.2.2 亲疏水性分析
2.2.3 信号肽与跨膜信息分析
2.2.4 亚细胞定位分析
2.2.5 结构域预测
2.2.6 分子功能预测分析
2.2.7 氨基酸序列比对
2.2.8 蛋白质二级结构预测分析
2.2.9 鸡CYP27A1蛋白质三级结构预测
2.3 讨论
第3章 鸡Cyp27a1的真核表达
3.1 实验材料
3.1.1 菌株与细胞
3.1.2 仪器与设备
3.1.3 主要试剂及材料
3.1.4 主要试剂配制方法
3.2 实验方法
3.2.1 Cyp27a1的cDNA的PCR扩增
3.2.2 pcDNATM3.1/myc-His(-)A质粒载体与Cyp27a1 PCR产物酶切
3.2.3 Cyp27a1 PCR片段与pcDNATM3.1/myc-His(-)A载体连接
3.2.4 筛选阳性克隆
3.3 293T细胞培养
3.3.1 细胞复苏
3.3.2 细胞传代
3.3.3 pcDNA-Cyp27a1重组质粒转染 293T细胞
3.4 Western Blotting检测
3.4.1 细胞中蛋白样品的收集
3.4.2 G250测蛋白的标准曲线制作
3.4.3 Western Blot实验
3.5 结果与分析
3.5.1 Cyp27a1的cDNA扩增
3.5.2 Cyp27a1的PCR产物酶切
3.5.3 菌液PCR检测
3.5.4 蛋白标准曲线的制作及蛋白浓度的测定
3.5.5 鸡CYP27A1真核表达蛋白的Western Blot检测
3.6 讨论
第4章 酶活实验
4.1 仪器设备
4.2 试剂及材料
4.3 试剂配制
4.4 实验方法
4.4.1 提取线粒体蛋白
4.4.2 蛋白浓度测定
4.4.3 酶活实验
4.5 鸡CYP27A1的生物活性检测结果及分析
4.6 讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
本文编号：3915415
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