利用酵母表面展示技术对肠炎沙门氏菌FliC蛋白在鸡体内抗原特性的研究

发布时间：2025-02-07 13:30

　　肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是一类泛嗜性沙门氏菌,其不仅是危害养禽业发展最为严重的病原之一,而且经常以污染的家禽产品为载体危害人类健康。由fliC基因编码的鞭毛蛋白是沙门氏菌重要的保护性抗原之一,可引起机体强烈的免疫应答反应。研究Fli C蛋白的优势抗原区对沙门氏菌新型疫苗的研发,进而减少人类食源性肠炎沙门氏菌的感染具有重要意义。本研究利用DNaseⅠ将SE的fliC基因随机酶切成100-500 bp的DNA小片段,将这些片段插入到酵母表面展示载体pCTCON-2中,并将其转入大肠杆菌中构建酵母随机展示文库pCTCON-fliC-Lib,其库容量大小约为2.7×105。通过基因测序确定文库p CTCON-fliC-Lib的随机性和插入片段的大小,结果显示随机挑取的50个克隆中的所有片段插入方向都是随机的,这些片段的大小在100-500 bp范围内,其分布能够覆盖整个fliC基因。将酵母展示文库pCTCON-fliC-Lib电击转入酿酒酵母EBY-100菌株中诱导表达。用SM6阳性血清染诱导表达的FliC文库p CTCON-fliC-Lib,通过流式细...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1酵母细胞壁的结构模式图(Shibasakietal.,2009)

围有一层约200nm厚的细胞壁，由位于质膜外的β-葡聚糖和甘有两层，内层是由β-1,3葡聚糖和β-1,6葡聚糖构成骨架层(Man3b)。外层是由甘露糖蛋白组成的纤维状结构，决定着酵母细onlanthen,1977)。内层和外层通过共价键相连(图1-1)。

图1-2酵母表面展示原理及其过程的示意图(Geraetal.,2013;Zuoetal.,2011)

图1-2酵母表面展示原理及其过程的示意图(Geraetal.,2013;Zuoetal.,2011)Fig.1-2Theschematicofyeastsurfacedisplayprincipleandprocess(Geraetal.....

图1-3酵母表面展示技术及其应用的示意图(KondoandUeda,2004)

检测与筛选测是临床诊断疾病的重要途径，抗原在酵母表面的成功展示是抗体检测与筛图1-3酵母表面展示技术及其应用的示意图(KondoandUeda,2004).1-3Yeastcellsurfaceengineeringanditsapplicationt....

图2-1fliC基因全长的PCR扩增结果

并以其为模板，以fliC-F，1%琼脂糖凝胶电泳分析。符(图2-1)。M12

本文编号：4030949