酶解牡丹籽蛋白抗氧化特性的研究
发布时间：2021-07-29 16:53
以牡丹籽蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡丹籽蛋白水解产物。考察了碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物在不同酶解时间下的分子量分布、氨基酸组成及抗氧化活性。研究结果表明碱性蛋白酶仅酶解1h即可完全水解牡丹籽蛋白所有的条带,并产生一系列小于15kDa的小分子量条带,而中性蛋白酶只能有限地水解牡丹籽蛋白。碱性蛋白酶能显著性地提高蛋白的ABTS和·OH自由基清除活性,尤其在酶解4h时清除率分别达到51.22%和73.66%。牡丹籽蛋白富含天冬氨酸和谷氨酸（23.33%～28.61%）,赋予碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物较好的Fe2+鳌合能力。
【文章来源】：中国调味品. 2020,45(12)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
酪氨酸标准曲线
分子量的大小和氨基酸组成是影响多肽生物活性和功能特性的两个重要因素。以往的研究表明，蛋白质水解物拥有高含量低分子量肽的抗氧化作用强于高分子量肽。碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解牡丹籽蛋白还原性SDS-PAGE电泳见图2。由图2可知，在还原性条件下，牡丹籽蛋白（TPSP）的电泳条带主要包括60,48,38,23kDa 4个条带。根据Gao等先前的结果，60kDa条带是TPSP中的主要组分，其主要由酸性亚基（38kDa）和碱性亚基（23kDa）组成。在中性蛋白酶水解物中分子量为48,38,23kDa的3个条带消失，一些小分子量条带经中性蛋白酶酶解后出现在分子量15kDa以下，而60kDa的条带随着时间的增加并未发生改变。对于碱性蛋白酶水解物，在牡丹籽蛋白中出现的所有蛋白质条带均完全消失，产生的低分子量条带（<15kDa）强度随着水解时间的增加而逐渐增加。Shazly等[15]也得到了类似的结果。他们报道称在还原条件下，碱性蛋白酶可广泛水解所有酪蛋白组分，产生<3.5kDa的分子量条带在SDS-PAGE图谱中。在长达4h的水解过程中，经碱性蛋白酶水解的水解物中观察到了从较高分子量带向较低分子量带的明显转变，说明碱性蛋白酶具有较强的水解牡丹籽蛋白的能力，这可能是因为碱性蛋白酶是一种非特异性的内肽酶，适于生产小分子量肽，同时这也可能有利于获得具有较高活性的抗氧化肽。
作为在人体内产生的活性氧种类之一，·OH自由基可以很容易地与生物分子发生反应，例如氨基酸、蛋白质、DNA，并导致机体生理异常。因此，清除·OH自由基可以防止某些疾病的产生。牡丹籽蛋白及其酶解产物（浓度1.5mg/mL）对·OH自由基的清除能力见图4。由图4可知，碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物清除·OH自由基的效果相当。在水解的1h时，碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解并未明显提高蛋白的·OH自由基清除能力，而随着水解反应的进一步进行，水解物的·OH自由基清除活性显著性增加。当水解反应到3h时，碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解物对·OH自由基的清除能力从45.69%(TPSP）分别增加到69.81%和70.3%。在整个水解过程中，中性蛋白酶水解物的最大清除率发生在水解3h时。然而，对于碱性蛋白酶水解物，·OH自由基清除能力的变化趋势与ABTS自由基清除活性相似，随着水解时间的增加而增加，在水解反应4 h时达到最大清除率73.66%。碱性蛋白酶和中性蛋白酶在酶解1h后可提高蛋白的·OH自由基清除能力，这可能是由于随着水解反应的进行更多的HAA被释放出来。
【参考文献】：
期刊论文
[1]洋葱蛋白及多肽的制备及其体外抗氧化活性评价[J]. 赵璇. 中国调味品. 2020(02)
[2]调味香料丁香精油的生物活性及其在食品保鲜中的应用研究进展[J]. 王颖,孙璐,柴冉,王娟娟,李荣,姜子涛. 中国调味品. 2020(02)
[3]抗氧化剂在淡盐青鱼干加工和贮藏中的应用研究[J]. 卢芸,周莹,董雪萌,张利文,戴阳军. 中国调味品. 2020(01)
[4]荞麦多酚在卤猪肉制品防腐保鲜中的应用[J]. 郝教敏,杨文平,靳明凯,杨珍平,徐向昕,高志强. 中国调味品. 2019(12)
[5]牡丹籽中营养和功能性成分研究进展[J]. 袁琴琴,刘文营. 食品工业科技. 2019(17)
[6]裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究[J]. 毕秋芸. 中国调味品. 2019(05)
[7]玉米蛋白水解物对生鸡肉糜脂质氧化的影响[J]. 许瑞雪,刘晓兰. 中国调味品. 2016(08)
[8]羊软骨胶原蛋白水解物在羊肉糜中抗氧化效果研究[J]. 呼和木其尔,杨志荣,阿茹汗,杨晓霞,莎丽娜. 食品科技. 2016(07)
[9]北五昧子藤茎三萜抗氧化活性研究[J]. 李斌,李元甦,孟宪军,薛雪,朱力杰. 食品工业科技. 2012(03)
硕士论文
[1]酶法制备玉米高F值寡肽及其抗疲劳活性的研究[D]. 刘金伟.山东轻工业学院 2012
本文编号：3309698
【文章来源】：中国调味品. 2020,45(12)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
酪氨酸标准曲线
分子量的大小和氨基酸组成是影响多肽生物活性和功能特性的两个重要因素。以往的研究表明，蛋白质水解物拥有高含量低分子量肽的抗氧化作用强于高分子量肽。碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解牡丹籽蛋白还原性SDS-PAGE电泳见图2。由图2可知，在还原性条件下，牡丹籽蛋白（TPSP）的电泳条带主要包括60,48,38,23kDa 4个条带。根据Gao等先前的结果，60kDa条带是TPSP中的主要组分，其主要由酸性亚基（38kDa）和碱性亚基（23kDa）组成。在中性蛋白酶水解物中分子量为48,38,23kDa的3个条带消失，一些小分子量条带经中性蛋白酶酶解后出现在分子量15kDa以下，而60kDa的条带随着时间的增加并未发生改变。对于碱性蛋白酶水解物，在牡丹籽蛋白中出现的所有蛋白质条带均完全消失，产生的低分子量条带（<15kDa）强度随着水解时间的增加而逐渐增加。Shazly等[15]也得到了类似的结果。他们报道称在还原条件下，碱性蛋白酶可广泛水解所有酪蛋白组分，产生<3.5kDa的分子量条带在SDS-PAGE图谱中。在长达4h的水解过程中，经碱性蛋白酶水解的水解物中观察到了从较高分子量带向较低分子量带的明显转变，说明碱性蛋白酶具有较强的水解牡丹籽蛋白的能力，这可能是因为碱性蛋白酶是一种非特异性的内肽酶，适于生产小分子量肽，同时这也可能有利于获得具有较高活性的抗氧化肽。
作为在人体内产生的活性氧种类之一，·OH自由基可以很容易地与生物分子发生反应，例如氨基酸、蛋白质、DNA，并导致机体生理异常。因此，清除·OH自由基可以防止某些疾病的产生。牡丹籽蛋白及其酶解产物（浓度1.5mg/mL）对·OH自由基的清除能力见图4。由图4可知，碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解产物清除·OH自由基的效果相当。在水解的1h时，碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解并未明显提高蛋白的·OH自由基清除能力，而随着水解反应的进一步进行，水解物的·OH自由基清除活性显著性增加。当水解反应到3h时，碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解物对·OH自由基的清除能力从45.69%(TPSP）分别增加到69.81%和70.3%。在整个水解过程中，中性蛋白酶水解物的最大清除率发生在水解3h时。然而，对于碱性蛋白酶水解物，·OH自由基清除能力的变化趋势与ABTS自由基清除活性相似，随着水解时间的增加而增加，在水解反应4 h时达到最大清除率73.66%。碱性蛋白酶和中性蛋白酶在酶解1h后可提高蛋白的·OH自由基清除能力，这可能是由于随着水解反应的进行更多的HAA被释放出来。
【参考文献】：
期刊论文
[1]洋葱蛋白及多肽的制备及其体外抗氧化活性评价[J]. 赵璇. 中国调味品. 2020(02)
[2]调味香料丁香精油的生物活性及其在食品保鲜中的应用研究进展[J]. 王颖,孙璐,柴冉,王娟娟,李荣,姜子涛. 中国调味品. 2020(02)
[3]抗氧化剂在淡盐青鱼干加工和贮藏中的应用研究[J]. 卢芸,周莹,董雪萌,张利文,戴阳军. 中国调味品. 2020(01)
[4]荞麦多酚在卤猪肉制品防腐保鲜中的应用[J]. 郝教敏,杨文平,靳明凯,杨珍平,徐向昕,高志强. 中国调味品. 2019(12)
[5]牡丹籽中营养和功能性成分研究进展[J]. 袁琴琴,刘文营. 食品工业科技. 2019(17)
[6]裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究[J]. 毕秋芸. 中国调味品. 2019(05)
[7]玉米蛋白水解物对生鸡肉糜脂质氧化的影响[J]. 许瑞雪,刘晓兰. 中国调味品. 2016(08)
[8]羊软骨胶原蛋白水解物在羊肉糜中抗氧化效果研究[J]. 呼和木其尔,杨志荣,阿茹汗,杨晓霞,莎丽娜. 食品科技. 2016(07)
[9]北五昧子藤茎三萜抗氧化活性研究[J]. 李斌,李元甦,孟宪军,薛雪,朱力杰. 食品工业科技. 2012(03)
硕士论文
[1]酶法制备玉米高F值寡肽及其抗疲劳活性的研究[D]. 刘金伟.山东轻工业学院 2012
本文编号：3309698
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