α-琼胶酶OUC-GaJJ96的异源表达及酶学性质

发布时间：2021-08-10 07:55

　　α-琼胶酶在功能性琼胶寡糖的酶法制备中发挥着重要作用,目前有关α-琼胶酶的研究较少。克隆表达了来自溶藻性吉尔维菌（Gilvimarinus agarilyticus）的α-琼胶酶,命名为OUC-GaJJ96,并对其酶学性质及水解产物进行研究。该酶属于糖苷水解酶96家族,基因全长为3 759 bp,编码1 252个氨基酸,N端含有26个氨基酸编码的信号肽,蛋白分子质量约为180 kDa。酶学性质研究显示:OUC-GaJJ96最适反应温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0（Tris-HCl缓冲液）,比酶活力为2.68 U/mg。通过高效液相色谱和电喷雾离子源质谱对OUC-GaJJ96的水解产物进行分析,结果表明:该酶水解产物是琼二糖、琼四糖和琼六糖,其中琼四糖是主要产物,OUC-GaJJ96可用于制备具有生物活性的琼胶寡糖。 

【文章来源】：食品科学技术学报. 2020,38(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

摇OUC-GaJJ96进化树分析Fig.1摇PhylogeneticanalysisofOUC-GaJJ96摇2郾2摇OUC-GaJJ96蛋白的表达及纯化结果

预测蛋白分子质量为136郾1kDa。2郾3摇酶学性质分析OUC-GaJJ96酶学性质研究结果见图3。图3(a)及图3(b)表明:OUC-GaJJ96在30益、pH值为7郾0(Tris-HCl缓冲液)的环境中表现出最高酶活力,与已报道的琢鄄琼胶酶相似。Lee等[19]报道的琢鄄琼胶酶AgaWS5在40益、pH值为8郾0的环境中表现出最高酶活力,且具有独特的耐寒性,在10益可保留超过40%的最高酶活力;Liu等[18]报道的M:标准蛋白Marker;1:粗酶蛋白;2:纯化的蛋白。图2摇OUC-GaJJ96蛋白纯化的SDS-PAGE分析结果Fig.2摇SDS-PAGEanalysisofOUC-GaJJ96摇琢鄄琼胶酶CaLJ96最适反应温度和pH值分别为37益、7郾0;Ohta等[16]报道的琢鄄琼胶酶AgaA33最适反应温度和pH值分别为45益、8郾5,可在40益环境中30min内保持稳定;Potin等[15]报道的琢鄄琼胶酶AgaA最适反应温度和pH值分别为42郾5益、7郾2,在低于30益的环境中保存几天后仍有酶活力,温度超05食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇2020年11月

图4摇OUC-GaJJ96水解产物的HPLC分析结果Fig.4摇HPLCanalysisofhydrolysisproductsofagarosehydrolyzedbyOUC-GaJJ96摇图5摇OUC-GaJJ96水解产物ESI-MS分析结果Fig.5摇ESI-MSanalysisofhydrolysisproductsofagarosehydrolyzedbyOUC-GaJJ96摇2郾68U/mg,在30益、pH值为7郾0(Tris-HCl缓冲液)条件下显示出最高酶活力,主要水解产物为琼四糖。OUC-GaJJ96除可用于偶数琼寡糖标品的制备外,参考茁鄄琼胶酶与琢鄄新琼二糖水解酶结合制备奇数低聚合度琼寡糖的方法及Yang等[21]的研究,可将OUC-GaJJ96与茁鄄半乳糖苷酶AgWH2A结合制备奇数新琼寡糖。通过对OUC-GaJJ96最适反应温度和pH值的考察,得到最佳反应条件,结合水解产25食品科学技术学报摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇摇2020年11月


本文编号：3333793