重组酶聚合酶快速扩增法测定瓶(桶)装水中铜绿假单胞菌
发布时间：2021-08-28 07:47
目的建立重组酶聚合酶扩增法（recombinasepolymeraseamplification,RPA）检测瓶（桶）装水中铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的分析方法。方法通过基因组DNA提取、RPA扩增反应方法对样品进行检测。结果该方法能够在20 min内特异地检测出铜绿假单胞菌,方法检出限为10 pg/μL铜绿假单胞菌基因组模板,对人工污染的水样最低检出限为36 CFU/mL,且重复性良好。结论本研究建立的RPA检测方法能特异、准确、高效地检测出铜绿假单胞菌,而且操作简单、耗时短,为瓶（桶）装水中铜绿假单胞菌的快速诊断提供技术参考。
【文章来源】：食品安全质量检测学报. 2020,11(19)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
铜绿假单胞菌灵敏度实验结果(n=3)
6918食品安全质量检测学报第11卷图2铜绿假单胞菌特异性实验结果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重复性以最低检测模板浓度(10pg/μL),进行3组平行实验,验证RPA检测方法的重复性。结果表明,3组平行均出现扩增曲线,而空白对照和阴性对照无扩增曲线(如图3所示),说明RPA检测方法具有较好的稳定性。重复独立检测3次均取得一致性检测结果。3.4人工污染样品的检测结果如图4所示,人工污染铜绿假单胞菌的桶装饮用水的检测结果表明,当污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min时检出饮用水中的铜绿假单胞菌,全部反应均可在20min内完成。重复独立检测3次均取得一致结果。图3铜绿假单胞菌重复性实验结果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)
6918食品安全质量检测学报第11卷图2铜绿假单胞菌特异性实验结果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重复性以最低检测模板浓度(10pg/μL),进行3组平行实验,验证RPA检测方法的重复性。结果表明,3组平行均出现扩增曲线,而空白对照和阴性对照无扩增曲线(如图3所示),说明RPA检测方法具有较好的稳定性。重复独立检测3次均取得一致性检测结果。3.4人工污染样品的检测结果如图4所示,人工污染铜绿假单胞菌的桶装饮用水的检测结果表明,当污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min时检出饮用水中的铜绿假单胞菌,全部反应均可在20min内完成。重复独立检测3次均取得一致结果。图3铜绿假单胞菌重复性实验结果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)
【参考文献】：
期刊论文
[1]广州市售瓶(桶)装水中铜绿假单胞菌污染现状及其耐药现象研究[J]. 周臣清,张娟,黄宝莹,佘之蕴,范安妮,赵玲. 中国酿造. 2017(12)
[2](瓶)桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析[J]. 张晓丽. 低碳世界. 2017(22)
[3]包装饮用纯净水微生物污染情况分析[J]. 骆业巧. 食品安全质量检测学报. 2017(01)
[4]包装饮用水铜绿假单胞菌的污染与预防[J]. 钟菲菲. 现代食品. 2017(01)
[5]223份桶装天然矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测结果分析[J]. 刘思超,徐励琴,罗泽燕,杨剑英,冯伟明,曹海燕. 预防医学情报杂志. 2016(10)
[6]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展[J]. 刘冬虹,王德莲,郭燕华,聂炎炎,吴环,曾国权. 检验检疫学刊. 2016(05)
[7]禹州市桶装饮用水直饮水铜绿假单胞菌污染状况调查[J]. 王全新,马红朋,王海欣,董晓红,王杏辉,马晓静,姜宏伟. 医药论坛杂志. 2016(02)
[8]桶装饮用水中铜绿假单胞菌的检测分析[J]. 李莉,朱晓露,马会会. 中国卫生检验杂志. 2016(03)
[9]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展[J]. 孙魁,邢微微,徐东刚. 军事医学. 2015(10)
[10]EMA-PCR方法检测饮用水中3种食源性致病菌活菌研究[J]. 陆星羽,张宏斌,张梦寒,陆巧荣. 现代预防医学. 2015(10)
本文编号：3368114
【文章来源】：食品安全质量检测学报. 2020,11(19)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
铜绿假单胞菌灵敏度实验结果(n=3)
6918食品安全质量检测学报第11卷图2铜绿假单胞菌特异性实验结果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重复性以最低检测模板浓度(10pg/μL),进行3组平行实验,验证RPA检测方法的重复性。结果表明,3组平行均出现扩增曲线,而空白对照和阴性对照无扩增曲线(如图3所示),说明RPA检测方法具有较好的稳定性。重复独立检测3次均取得一致性检测结果。3.4人工污染样品的检测结果如图4所示,人工污染铜绿假单胞菌的桶装饮用水的检测结果表明,当污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min时检出饮用水中的铜绿假单胞菌,全部反应均可在20min内完成。重复独立检测3次均取得一致结果。图3铜绿假单胞菌重复性实验结果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)
6918食品安全质量检测学报第11卷图2铜绿假单胞菌特异性实验结果(n=3)Fig.2SpecificresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)3.3重复性以最低检测模板浓度(10pg/μL),进行3组平行实验,验证RPA检测方法的重复性。结果表明,3组平行均出现扩增曲线,而空白对照和阴性对照无扩增曲线(如图3所示),说明RPA检测方法具有较好的稳定性。重复独立检测3次均取得一致性检测结果。3.4人工污染样品的检测结果如图4所示,人工污染铜绿假单胞菌的桶装饮用水的检测结果表明,当污染量≥36CFU/mL,real-timeRPA即可在8～20min时检出饮用水中的铜绿假单胞菌,全部反应均可在20min内完成。重复独立检测3次均取得一致结果。图3铜绿假单胞菌重复性实验结果(n=3)Fig.3RepetitiveresultsofPseudomonasaeruginosa(n=3)
【参考文献】：
期刊论文
[1]广州市售瓶(桶)装水中铜绿假单胞菌污染现状及其耐药现象研究[J]. 周臣清,张娟,黄宝莹,佘之蕴,范安妮,赵玲. 中国酿造. 2017(12)
[2](瓶)桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析[J]. 张晓丽. 低碳世界. 2017(22)
[3]包装饮用纯净水微生物污染情况分析[J]. 骆业巧. 食品安全质量检测学报. 2017(01)
[4]包装饮用水铜绿假单胞菌的污染与预防[J]. 钟菲菲. 现代食品. 2017(01)
[5]223份桶装天然矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测结果分析[J]. 刘思超,徐励琴,罗泽燕,杨剑英,冯伟明,曹海燕. 预防医学情报杂志. 2016(10)
[6]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展[J]. 刘冬虹,王德莲,郭燕华,聂炎炎,吴环,曾国权. 检验检疫学刊. 2016(05)
[7]禹州市桶装饮用水直饮水铜绿假单胞菌污染状况调查[J]. 王全新,马红朋,王海欣,董晓红,王杏辉,马晓静,姜宏伟. 医药论坛杂志. 2016(02)
[8]桶装饮用水中铜绿假单胞菌的检测分析[J]. 李莉,朱晓露,马会会. 中国卫生检验杂志. 2016(03)
[9]重组酶聚合酶扩增技术的研究进展[J]. 孙魁,邢微微,徐东刚. 军事医学. 2015(10)
[10]EMA-PCR方法检测饮用水中3种食源性致病菌活菌研究[J]. 陆星羽,张宏斌,张梦寒,陆巧荣. 现代预防医学. 2015(10)
本文编号：3368114
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