体外模拟胃肠消化及碱性蛋白酶处理后蛋清肽抗氧化活性差异及肽序列解析

发布时间：2024-04-20 10:48

　　为明确体内消化和体外加工处理后蛋白肽抗氧化活性差异,验证蛋白肽体外加工的必要性,本实验以蛋清蛋白为原料,利用体外化学手段对比了体外模拟胃肠消化及碱性蛋白酶处理后蛋清肽抗氧化活性变化,通过构建双氧水损伤HepG2细胞模型,验证高活性组分(分子质量小于1 kDa的碱性蛋白酶酶解物)的细胞抗氧化能力。结果表明,碱性蛋白酶酶解物的抗氧化活性明显高于体外模拟胃肠消化产物及未经处理的蛋清蛋白,酶解和消化产物的抗氧化活性与其分子质量呈负相关并表现出明显的量效关系。其中分子质量小于1 kDa的碱性蛋白酶酶解物能够有效抑制H₂O₂诱导的HepG2细胞内活性氧的产生,进而阻止细胞的氧化应激损伤和凋亡。利用超高效液相色谱-串联质谱,从中解析出3条四肽(FYCP、YCPI、YLPR),均具有良好的抗氧化活性。本研究在一定程度上为蛋品深加工的方法和意义提供了实验依据。

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【部分图文】：

图1蛋清肽的ABTS阳离子自由基清除能力

ABTS阳离子自由基清除能力的测定因其快捷、高效、可信度高，被广泛应用于评价水溶性物质的抗氧化活性[14]。如图1所示，未经处理的蛋清蛋白ABTS阳离子自由基清除能力很差，在经过碱性蛋白酶酶解或者体外模拟胃肠消化后的蛋清蛋白被分解为多肽或者氨基酸，活性基团得以暴露；因此，在同一质....

图2蛋清肽的氧自由基吸收能力

由于氧自由基吸收能力可以直接反映抗氧化剂阻断自由基链式反应的能力，被认为是最接近人体生理系统真实反应情况的实验方法[18]。ORAC反应是典型的基于氢原子转移机制的氧化过程，氢原子转移是自由基链式反应中的关键步骤，反应后会形成更加稳定的自由基[19]。图2表示蛋清肽在质量浓度为1....

图3不同浓度H2O2对HepG2细胞相对存活率的影响

H2O2可诱导细胞氧化损伤，刺激细胞内ROS的生成，打破细胞内氧化还原反应平衡，从而增强细胞氧化应激，最终可导致细胞损伤和凋亡[20]。由图3可知，随H2O2浓度的升高，HepG2细胞的相对存活率降低，即氧化损伤作用越强。当H2O2的终浓度为500μmol/L时HepG2细胞....

图4蛋清肽对HepG2细胞相对存活率的影响

为排除蛋清肽毒性作用的影响，在未加H2O2损伤的情况下，检测最高质量浓度（1mg/mL）蛋清肽对HepG2细胞生长的影响，实验组和对照组细胞相比存活率均无显著性差异（P>0.05），说明蛋清肽本身对HepG2细胞无毒副作用。排除高质量浓度蛋清肽刺激细胞的可能性后，蛋清肽对....

本文编号：3959300