条斑紫菜蛋白酶解液α-葡萄糖苷酶和DPP-IV抑制活性的表征及肽成分解析

发布时间：2024-05-28 05:32

　　在特定可控酶解条件下制备获得条斑紫菜1 000 Da以下小分子多肽为主的蛋白酶解液,分析发现其具有对α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase IV,DPP-IV)的双酶抑制活性,且具有良好的pH值、温度稳定性和胃肠消化耐受性。将酶解液经超滤、纳滤、凝胶过滤层析分离纯化后,采用超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间质谱对活性成分进行鉴定,解析出2条多肽氨基酸序列为Ala-Pro、Pro-Gly-Gly-Val。按上述序列合成出这2条多肽(纯度99.69%)表征其对2种酶的抑制活性,结果表明:Pro-Gly-Gly-Val为双酶抑制肽,它对α-葡萄糖苷酶的IC50为18.60 mmol/L,对DPP-IV的IC50为17.80 mmol/L;而Ala-Pro只对DPP-IV有抑制作用,其IC50为4.65 mmol/L。

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【部分图文】：

图1条斑紫菜酶解多肽分子质量分布（a）和相对含量（b)

2.1条斑紫菜酶解多肽双酶抑制活性分析α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶是糖代谢途径中的关键酶，调控碳水化合物降解为单糖的反应[24]。α-葡萄糖苷酶抑制剂和α-淀粉酶抑制剂可以延缓多糖向单糖的转化。DPP-IV抑制剂通过抑制DPP-IV对GLP-1的降解，提高餐后胰岛素水平。通过测定....

图2粗肽液对两种酶的pH值（a）、温度（b）稳定性

如图2a所示，条斑紫菜酶解多肽具有较宽的pH值耐受范围。在pH?3～10范围内，条斑紫菜酶解多肽对α-葡萄糖苷酶抑制活性保持率达98%以上；DPP-IV抑制活性保持率在pH?3～8范围内逐渐上升且总体抑制活性保持率高于96%,pH?8.0以上时开始逐渐降低。因此，紫菜多肽....

图3粗肽液对两种酶的胃肠消化稳定性

2.2.2体外模拟胃肠消化粗肽液经胃消化阶段后，其α-葡萄糖苷酶抑制活性稳定不变，再经十二指肠环境下胰蛋白酶作用后抑制率升高了30.48%;DPP-IV抑制率在胃消化和肠消化阶段都有一定的提高，分别上升了15.38%、39.23%（图3）。天然的活性肽是否能作为降血糖药物的代替....

图4SephadexG-10凝胶层析图谱（a）及各个峰的抑制活性（b)

基于粗肽液较高的双酶抑制活性，良好的pH值、温度和胃肠消化稳定性，对粗肽液进行进一步分离纯化，解析其多肽氨基酸组成。凝胶过滤层析是按分子质量大小进行分离的，Sephadex?G-10交联度高、网孔小，分级范围小于700?Da[34]。如图4a所示，纳滤后的条斑紫菜酶解液经Sep....

本文编号：3983557