基于荧光光谱技术的异槲皮素抑制晚期糖基化产物形成的机制研究

发布时间：2024-12-18 03:08

　　 荧光光谱学法具有灵敏度高、选择性强、样品用量少、操作简便的优点,同时又可提供多种分子间相互作用的物理参数,所以被广泛用于研究小分子和蛋白质的相互作用。因此,通过内源荧光、同步荧光以及三维荧光光谱技术,研究异槲皮素抑制α-乳白蛋白（α-lactalbumin,α-La）-果糖体系糖基化过程中晚期糖基化产物（AGEs）形成的能力,并从分子间相互作用的角度阐述其作用机制,最终阐明异槲皮素抑制食品热加工过程中AGEs形成的能力。结果表明,异槲皮素可显著降低糖基化反应诱导的α-La构象变化,抑制AGEs的形成,样品浓度为36.58μmol·L^-1时,其抑制率达74.66%,高于阳性对照品氨基胍盐酸盐。同步荧光和三维荧光光谱分析结果表明,异槲皮素会改变α-La的构象,使色氨暴露于更亲水的环境中,增加其微环境的亲水性。抑制动力学和热力学分析结果显示,异槲皮素通过静态方式猝灭α-La的内源荧光,且与α-La按照1∶1的摩尔比例结合形成了稳定的复合物,该结合是一个自发放热的过程,范德华力和氢键是异槲皮素-α-La复合物形成的主要作用力。

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【部分图文】：

图1 异槲皮素对α-La-果糖体系中AGEs形成的影响

蛋白糖基化过程中形成的AGEs包括荧光性AGEs和非荧光性AGEs组成,因此,很多研究者采用荧光光谱技术评价样品抑制蛋白糖基化过程中AGEs形成的能力,荧光强度越高,表明反应体系中AGEs形成的相对含量越高,抑制率就越低。异槲皮素对α-La-果糖体系中AGEs形成的影....

图2 不同浓度异槲皮素对糖基化α-La内源荧光光谱

异槲皮素对糖基化α-La内源荧光强度的影响如图2所示。天然α-La具有最大荧光强度,糖基化后α-La的荧光从3386降低至2357。说明糖基化反应能显著降低了α-La的内源荧光,可诱导蛋白构象的展开,降低其内源荧光强度[14]。但随着异槲皮素浓度从12.20μm....

图3 α-La与不同浓度异槲皮素作用的同步荧光光谱

三维荧光光谱技术可以研究蛋白质的构象变化。异槲皮素对天然α-La的三维荧光光谱的影响如图4所示,Rayleigh(Ex=Em)峰是瑞利散射峰,峰1(Ex=280nm,Em=330nm)为色氨酸残基的分光特性峰,主要表明蛋白质的多肽骨架结构的变化。从图4(a)和(b....

图4 异槲皮素对α-La三维荧光光谱的影响

以异槲皮素浓度[Q]为横坐标,F0/F为纵坐标绘制的Stern-Volmer曲线如图5(b)所示,根据方程计算的KSV和Kq如表1所示,KSV随着反应温度的升高而降低,Kq在298,304和310K时的值分别为6.07×1012,5.33×1012和5.14×101....

本文编号：4016958