甘蓝夜蛾核型多角体病毒DNA解旋酶2的原核表达研究

发布时间：2022-01-08 04:47

　　甘蓝夜蛾核型多角体病毒（Mamestra brassicae multiple nucleopolyhedrovirus,简称为MbMNPV）属于杆状病毒科,是一株能感染多种鳞翅目害虫的广谱病毒,但决定其广谱性的机制尚不清楚。杆状病毒DNA解旋酶（helicase）基因除了参与DNA复制以外,被发现还具有决定杆状病毒宿主域的功能。MbMNPV具有两个DNA解旋酶基因,解旋酶（helicase）和解旋酶2（helicase 2,或hel-2）。为了确定MbMNPV的解旋酶2是否具有扩大病毒宿主域的功能,将该基因在大肠杆菌中进行原核表达,结果显示该蛋白只能以包涵体的形式进行表达,并不能形成可溶性表达产物,未来要想检测该基因是否具有提高病毒宿主域的功能,要进一步优化表达条件,使hel-2蛋白能够可溶性表达。 

【文章来源】：生物化工. 2020,6(03)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

hel-2基因PCR扩增产物

对该PCR产物和pET28a载体分别用Not I/Xho I进行双酶切，对酶切后的产物DNA凝胶电泳和切胶回收后，进行酶连转化，对转化平板上的单菌落抽提质粒，使用Not I/Xho I进行双酶切验证。结果如图2所示，载体片段大小和外源目的片段大小（1 368 bp）与预期一致，表明hel-2基因片段已经连入表达载体pET-28a，将酶连产物送到测序公司进行测序验证，结果显示序列正确无误。2.2 Hel-2蛋白诱导条件摸索

在诱导温度37℃、0.4 mmol/L的IPTG浓度下，检测了不同诱导时间对Hel-2蛋白表达的影响，收集IPTG诱导不同时间的BL21菌体，超声破碎菌体后分别收集沉淀与上清，使用SDS-PAGE检测，结果如图3所示。诱导后1 h开始，可以在沉淀中检测到目的蛋白表达，与预期大小一致，随着诱导时间的增加，还是只能在沉淀中检测到目的蛋白表达，而上清液中没有检测到目的蛋白表达。为了增加蛋白的可溶性表达，决定尝试低温诱导的方式，诱导温度18℃，诱导时间为16 h，在不同IPTG浓度下进行诱导，收集不同IPTG诱导浓度的菌体，超声破碎菌体后分别收集沉淀与上清，使用SDS-PAGE检测，结果如图4所示。低温诱导的Hel-2蛋白还是只在沉淀里表达，在上清里面没有检测到目的蛋白，但与37℃诱导条件相比，沉淀中的目的蛋白生成总量有所降低。

【参考文献】：
期刊论文
[1]一种用昆虫病毒研发高效安全的新型生物农药正在全面推广——中国科学院广谱高效昆虫杆状病毒杀虫剂的研制和应用[J]. 张忠信.  科技促进发展. 2016(01)
[2]家蚕核型多角体病毒多角体的快速提取方法[J]. 李俊,屈达才,邱靖芸.  广西蚕业. 2011(01)



本文编号：3575916