人脐带与胎盘来源的间充质干细胞生物学特性及免疫调节作用的比较

发布时间：2017-12-29 02:32

  本文关键词：人脐带与胎盘来源的间充质干细胞生物学特性及免疫调节作用的比较　出处：《暨南大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新(self-renewal)和多向分化潜能(multi-lineage differentiation)的成体干细胞,最早在骨髓中发现,后经研究证实,在脂肪、骨膜、滑膜、肌肉、牙髓中都发现了这种特殊的细胞群。由于其特殊的生物学特性,间充质干细胞现已经逐渐成为组织工程和再生医学的主要种子细胞。目前,骨髓仍然是间充质干细胞的主要来源。但其获取途径为一倾入性的过程,并且,骨髓来源的间充质干细胞其质量和数量都随着供者年龄的增长而逐渐降低。以上的因素,限制了间充质干细胞在组织工程和临床中的运用。目前,较多的研究都证明,人类脐带及胎盘来源的间充质干细胞来源广泛,且较骨髓来源的细胞更易体外扩增,并具有更低的免疫原性,因而已经逐渐成为一种较好的骨髓间充质干细胞的替代细胞。但是迄今为止,对于胎盘及脐带来源的间充质干细胞其生物学特性,尚无较为深入的研究。 目的： 分离、鉴定、培养人类脐带、羊膜、绒毛膜来源的间充质干细胞,比较三种来源细胞的生物学特性,并且初步检测其免疫调节方面的作用。 方法： 在本实验中,我们使用胶原酶消化法,分离出脐带、羊膜及绒毛膜组织,并且使用贴壁培养纯化进行原代和传代培养三种细胞。通过短串联重复序列分析检测绒毛膜来源细胞是否来源于胎儿绒毛膜,用MTT法检测三种细胞生长方式,流式细胞仪分析三种细胞表型及干细胞标记,使用不同的诱导分化培养基检测其多向分化的能力。最后将三种细胞与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,通过酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平观察比较人脐带来源间充质干细胞免疫调节效应。 结果： 短串联重复序列分析证明绒毛膜来源间充质干细胞为胎儿来源。三种细胞的生长均呈典型的成纤维细胞形态,贴壁生长,绒毛膜间充质干细胞的形态较脐带和羊膜来源间充质干细胞稍大。细胞的倍增时间由快到慢依次为：UC-MSCs、AM-MSCs、CM-MSCs。三种细胞均表达常见的间充质干细胞表面标记CD90、CD73、CD 105、CD44,不表达CD31,CD34和CD45。同时,三种细胞均表达多潜能性转录因子SSEA-4、Nestin和Sox-2。在不同的条件培养基培养状态下,三种细胞可向成骨、成脂方向分化。这些结果证明所得到的细胞为间充质干细胞。当与人类外周血单个核细胞共培养的时候,三种来源间充质干细胞均能显著抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素,抑制效果由强到弱依次为：UC-MSCs、CM-MSCs、AM-MSCs。 结论： 我们成功从人类脐带、胎盘羊膜、绒毛膜分离培养和纯化出间充质干细胞,三种细胞的生物学特性以及免疫调节作用上均存在一定差异。
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【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：1348478