缺氧诱导因子-1a增强骨形态发生蛋白-9介导的间充质干细胞成骨分化及其机制研究

发布时间：2018-01-12 05:08

  本文关键词：缺氧诱导因子-1a增强骨形态发生蛋白-9介导的间充质干细胞成骨分化及其机制研究　出处：《重庆医科大学》2012年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：研究背景：间充质干细胞（MSCs）具有自我更新能力，能分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞和肌原性细胞等。其成骨诱导分化特征具有临床应用价值。可用来治疗如节段性骨缺损、骨不连及脊柱融合失败等。在生物组织工程骨再生领域中，有着广泛的应用潜能。本实验室系统比较了从BMP2到BMP15的多种BMP家族成员，证明BMP9是体内外诱导MSCs成骨分化最强的成员之一。明确其它生长因子能否协同和促进BMP9介导的成骨分化能力及其机制研究，将为构建高效成骨植骨材料寻找新的方向。 实验方法：在本文中，作者针对缺氧诱导因子1a（Hypoxia-inducible factor1a, HIF1a）在BMP9介导的成骨过程中的作用进行了研究。首先，通过AdEasy重组腺病毒系统构建并鉴定HIF1a表达腺病毒的构建及鉴定。研究HIF1a增强BMP9介导的间充质干细胞分化成骨作用的体内、外实验研究；并初步研究BMP9和HIF1a之间的交叉调控机制。 结果：MSCs的HIF1a内源性表达极低。用AdEasy重组腺病毒技术构建Ad-HIF1α，常氧下转染MSCs；MSCs可高水平并持续表达HIF1α。外源性高表达HIF1a可明显提高由BMP9介导的C3H10T1/2、iMEFs等间充质干细胞的早期成骨标志物碱性磷酸酶（ALP）和中晚期成骨标志物的表达。HIF1a沉默可抑制BMP9介导的MSCs早期成骨标志物碱性磷酸酶（ALP）表达活性和晚期成骨分化标志物矿化钙盐结节形成。HIF1a拮抗剂CAY10585抑制HIF1a的转录和翻译水平，起到拮抗HIF1a的作用。CAY10585可抑制BMP9的促进MSCs的ALP活性和钙盐结节形成。CoCl2化学诱导模拟建立缺氧模型下，HIF1a沉默可抑制HIF1a蛋白生成。HIF1a沉默可抑制BMP9介导的MSCs的ALP活性和细胞晚期成骨分化和矿化作用。在干细胞移植实验中，HIF1a能增强BMP9介导的体内异位骨形成。ChIP技术证实BMP9刺激导致Smad1/5/8复合体招募结合到HIF1a启动子；提示BMP9调控的间充质干细胞成骨分化信号中，Smad1/5/8可配合HIF1a的转录。BMP9可促进MSCs内HIF1a的mRNA表达和蛋白生成。HIF1a可明显增强BMP9及其受体结合后介导的Smad1/5/8磷酸化激活过程。HIF1a与BMP9共同作用于间充质干细胞时，存在交叉调控（Cross-talk）机制，表现为BMP9激活并强化HIF1a的功能，而HIF1a也能明显增强Smad1/5/8磷酸化过程，从而促进BMPs-Smad经典通路信号活化和传导，，并最终协同BMP9促进间充质干细胞的成骨诱导分化。 结论：综上所述，BMP9与HIF1a协同可促进间充质干细胞成骨诱导分化，用于治疗节段性骨缺损、骨折不愈合和骨质疏松性骨折等。
[Abstract]:BACKGROUND : Mesenchymal stem cells ( MSCs ) have self - renewal ability and can differentiate into osteoblasts , chondroblasts , lipocytes and myogenic cells . In this paper , the effect of hypoxia - inducible factor 1a ( HIF1a ) on BMP9 - mediated osteogenic process was studied . First , the construction and identification of HIF1a expression adenovirus was constructed and identified by AdEasy recombinant adenovirus system . HIF1a silencing inhibits BMP9 - mediated expression of HIF1 / 5 / 8 . HIF1a inhibits BMP9 - mediated phosphorylation of HIF1a . HIF1a inhibits BMP9 - mediated transcription and translation of HIF1a . The HIF1a suppresses the activation and conduction of BMP9 - mediated Smad1 / 5 / 8 phosphorylation , and eventually promotes the osteogenic differentiation of BMP9 - mediated mesenchymal stem cells . Conclusion : In conclusion , the combination of BMP9 and HIF1a can promote the differentiation of mesenchymal stem cells into bone - induced differentiation , and can be used for treating segmental bone defects , fracture healing and osteoporotic fracture .

【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.2

【共引文献】

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本文编号：1412801