PGE2在BLM致大鼠肺纤维化模型中的变化及意义研究

发布时间：2018-01-15 14:10

本文关键词：PGE2在BLM致大鼠肺纤维化模型中的变化及意义研究　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：特发性肺间质纤维化（(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种病因不明的弥漫性肺疾病，以炎症反应、成纤维细胞增殖和细胞外基质蛋白沉积为特点，病因众多复杂。多发病于50岁后。肺功能显示限制性通气功能障碍和重度的弥散功能障碍，血气分析显示严重的低氧血症，，且预后不良，患者最终多死于呼吸衰竭。其发病机制尚未明确，且无针对性的治疗措施。目前的治疗方法主要是应用糖皮质激素或联合免疫抑制剂。疗效不理想，毒副作用大。新的治疗理念，方法及药物显得极为重要。人肺成纤维细胞的体外实验研究表明，前列腺素E2(PGE2)能抑制成纤维细胞的增殖分化，胶原的合成。且可对肿瘤坏死因子α（TNF-α），转换生长因子-β（TGF-β）致炎致纤维化产生负性影响。本实验旨在用塞来昔布抑制博来霉素致大鼠纤维化模型中的前列腺素的合成。通过观察肺组织内前列腺素E2分布，并间接量化其含量，以及测量肺泡灌洗液中环磷腺苷（CAMP） TNF-α的表达水平,并做相关统计分析，以观察前列腺素E2（PGE2）在肺纤维化模型中的动态变化，给予16，16二甲基前列腺素E2干预，并测定上述指标进一步论证PGE2在肺纤维化中的作用和可能存在的机制。方法：选取清洁级健康、雄性SD大鼠(河北医科大学实验动物中心提供)120只，体重220±10g，适应性饲养一周后，随机分为4组对照组（NS组）：30只，气管内注入0.1ml/100g生理盐水，之后第一天开始，用生理盐水每日一次灌胃，同时用生理盐水每日一次肌肉注射，分别于7、14、28天各处死10只。（2）模型组（BLM组）：30只，于气管内一次性注入博来霉素（5mg/kg），于造模后第一天开始给予生理盐水每日灌胃一次，用生理盐水每日肌肉注射一次。分别于7、14、28天处死。（3）塞来昔布（SL组）：30只，气管内一次性注入博来霉素（5mg/kg），于造模后第七日用塞来昔布溶液（塞来昔布与生理盐水配成5%溶液）250mg/kg灌胃，1次/d，同时用生理盐水0.1ml/200g每日一次肌肉注射。分别于7、14、28天处死。前六日均给予NS0.5ml/200g灌胃(4)16,16二甲基前列腺素E2组（PG组）气管内一次性注入博来霉素（5mg/kg），于造模后第一日起给予16,16二甲基前列腺素E2肌肉注射（100ug/kg.d），同时用生理盐水0.5ml/200g每日一次灌胃。分别于7，14，28天处死。各组取右肺下叶固定于4%多聚甲醛溶液中，制作病理切片通过HE染色、Masson胶原染色来评价肺泡炎和肺纤维化的程度，并按照Szapiel法分为4级。用免疫组化法检测PGE2，并用图像分析系统半定量测定PGE2的平均积分光密度值，以此值来代替肺组织中PGE2的含量。右肺上叶制成匀浆测定肺组织中羟脯氨酸浓度，对左肺进行肺泡灌洗，测定肺泡灌洗液中环磷腺苷（CAMP） TNF-α含量。采用SPSS13.0统计软件处理并计较分析各组数据。结果： 1肺组织病理分析结果：在同一时间点，BLM组肺泡炎高于NS（P0.05），BLM组纤维化程度各时间点亦显著高于NS组（P0.05）。表明动物模型复制成功。SL组14,28天肺泡炎及纤维化程度均高于BLM组（p0.05）。7天时肺泡炎程度与BLM组比较无统计学差异，纤维化程度较BLM组7天无统计差异，14天，28天时均高于BLM组（p0.05）。PG组各时间点肺泡炎及纤维化程度与BL组SL组均明显减轻(P0.05)。 2肺组织羟脯氨酸（HYP）含量变化：BLM组大鼠肺组织匀浆中HYP含量随着造模时间延长逐渐升高，于28天达高峰，与NS组比各时间点HYP含量均升高且具有统计学意义（P0.05）。SL组大鼠HYP含量随时间延长呈增高趋势，于28天达高峰。7天时与BLM组比较无统计学差异，14天28天时均高于BLM组（p0.05）。PG组与BLM组SL组各时间点比较HYP含量均减低，具有统计学意义（p0.05）。 3肺组织中PGE2含量变化：SL组大鼠肺组织中PGE2含量表达14天28天时均低于BLM组（p0.05），7天时比较无统计差异。BLM组7天时与NS组比较是升高的，有统计差异（P0.05）。但14天28天时低于NS组（P0.05），由于PG组加入了活化的前列腺素E2衍生物16，16二甲基前列腺素E2，免疫组化显示各时间点均高于BLM组（p0.05）。 4肺泡灌洗液中TNF-α，CAMP含量变化：BLM组各时间点与NS组比较TNF-α明显增高（p0.05）.SL组大鼠肺组织中TNF-α表达量于14、28天均高于BLM组（p0.05），PG组与BLM组比较各时间点TNF-α的含量是降低的（p0.05）。7天时各组CAMP比较未见统计学差异。而于14天28天时BLM组显著低于NS组（p0.05），SL组低于BLM组（p0.05）。PG组与BLM组比较14天28天时均升高（p0.05）。结论： 1应用博来霉素气管内给药，可引起明显的肺泡炎和肺纤维化，复制肺纤维化模型具有可行性。 2肺纤维化动物与正常动物比较在炎症损伤期肺组织PGE2含量升高，而在纤维化形成过程中及纤维化后期肺组织中PGE2含量降低。纤维化肺组织肺泡灌洗液中CAMP含量降低，TNF-α含量是升高的。 3PGE2可能为纤维化保护因子。其抑制TNF-α的合成，增加CAMP的含量可能为其保护作用的重要机制。 4在早期肺泡炎程度无明显差异的情况下，抑制PGE2合成可使肺纤维化加重，炎症并非肺纤维化发生发展存在的充分必要条件，纤维化加重可独立于炎症情况改变而发生。 5应用16，16二甲基前列腺素E2可减轻博来霉素所致的肺泡炎和纤维化程度。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.9;R-332

【参考文献】