bFGF结合肽对bFGF刺激的K562细胞增殖的影响及其作用机制

发布时间：2018-03-08 19:51

  本文选题：bFGF　切入点：结合肽　出处：《暨南大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：探讨前期从噬菌体展示随机七肽库中获得的新型bFGF特异性结合肽(P7)对bFGF诱导的K562细胞增殖的影响及其机制。 方法：倒置显微镜下观察结合MTT法检测P7对细胞的毒性作用,MTT法检测不同浓度的P7单独作用对K562细胞增殖的影响,并进一步检测P7对bFGF刺激的K562细胞增殖的作用；流式细胞术分析P7对bFGF作用的K562细胞周期的影响;western blot检测P7对bFGF刺激的K562细胞中细胞外调节蛋白激酶ERK1/2和其上游蛋白促增殖信号分子MEK活化水平的影响；原子力显微镜检测P7对bFGF刺激的K562细胞表面超微结构的影响;应用蛋白质组学的双向电泳和质谱联用技术,获得P7处理前后bFGF诱导的K562细胞中差异表达蛋白情况,并通过western blot加以验证。 结果：检测的浓度范围内P7对K562细胞形态和增殖无显著影响,但可呈剂量依赖性抑制bFGF诱导的K562细胞增殖；P7可减少bFGF刺激下处于S期的细胞比率,使细胞阻滞在G0/G1期；P7可降低bFGF激活的K562细胞中信号分子ERK1/2和MEK的磷酸化水平；bFGF刺激K562细胞增殖时,细胞表面粗糙度增加,P7抑制bFGF诱导的K562细胞增殖时,细胞表面粗糙度降低；实验得到了14个差异表达蛋白(如PA2G4, EIF3I, PSME2等),其中9种上调,5种下调,并获得了相应的肽质量指纹图谱,western blot也进一步验证了差异蛋白PA2G4的表达情况。 结论：P7可抑制bFGF诱导的K562细胞增殖,其抑制作用可能通过阻滞细胞在G0/G1期、下调bFGF诱导的K562细胞中信号分子ERK1/2和MEK活化水平、降低细胞膜表面超微结构,以及通过影响—些与细胞增殖相关蛋白的表达而实现的。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of a novel bFGF binding peptide P7 from phage display random heptapeptide library on the proliferation of K562 cells induced by bFGF and its mechanism. Methods: the cytotoxic effects of P7 on K562 cells were observed under inverted microscope. The effects of P7 alone on the proliferation of K562 cells were detected by MTT assay, and the effects of P7 on the proliferation of K562 cells stimulated by bFGF were further examined. The effect of P7 on the cell cycle of K562 cells induced by bFGF was analyzed by flow cytometry. The effects of P7 on the activation of extracellular regulated protein kinase (ERK1/2) and its upstream protein-stimulated proliferative signal molecule (MEK) in K562 cells stimulated by bFGF were detected by western blot. The effect of P7 on the surface ultrastructure of K562 cells stimulated by bFGF was examined by atomic force microscope, and the differential expression protein of K562 cells induced by bFGF before and after P7 treatment was obtained by using proteomics two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry. It is verified by western blot. Results: P7 had no significant effect on the morphology and proliferation of K562 cells, but it could inhibit the proliferation of K562 cells induced by bFGF in a dose-dependent manner. P7 could reduce the ratio of K562 cells in S phase stimulated by bFGF. P7 blocked in G _ 0 / G _ 1 phase could decrease the phosphorylation level of signal molecules ERK1/2 and MEK in K562 cells activated by bFGF. The surface roughness of K562 cells increased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF, and the surface roughness of K562 cells decreased when P7 inhibited the proliferation of K562 cells induced by bFGF. Fourteen differentially expressed proteins (such as PA2G4, EIF3I, PSME2, etc.) were obtained, of which 9 were up-regulated and 5 down-regulated, and the corresponding peptide mass fingerprint Western blot was obtained to further verify the expression of differential protein PA2G4. Conclusion the proliferation of K562 cells induced by bFGF can be inhibited by WP7. The inhibition may decrease the level of ERK1/2 and MEK activation in K562 cells induced by bFGF at G _ 0 / G _ 1 phase and decrease the ultrastructure of cell membrane surface. And by influencing the expression of proteins associated with cell proliferation.
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

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本文编号：1585317