血清E型沙眼衣原体小鼠下生殖道感染模型的标准化研究

发布时间：2018-03-10 07:06

  本文选题：沙眼衣原体　切入点：小鼠模型　出处：《北京协和医学院》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)是专性细胞内寄生的具有特殊生活周期的原核微生物,人感染沙眼衣原体后会出现一系列的临床疾病,其D-K血清型引起的泌尿生殖系统感染是目前最常见的性传播疾病。对于女性感染者,衣原体感染虽没有明显的临床表现,却又特异性地损害生殖管道的柱状上皮细胞,与阴道炎、宫颈炎,子宫内膜炎、输卵管炎、盆腔炎、不孕、流产等存在一定的相关性。目前全世界每年约有9300万新发病例,我国的新发病例也有逐年增加的趋势,衣原体的生殖道感染作为一个公共卫生问题值得关注。 沙眼衣原体的生殖道感染动物模型的研究有助于对衣原体造成的人类疾病病理损伤机制的理解。基于E型沙眼衣原体在衣原体感染生殖道所致疾病中临床检出率最高,本课题建立了血清E型衣原体下生殖道感染的小鼠模型。首先在体外经感染靶细胞HeLa229扩增了沙眼衣原体,确定了衣原体体外扩增的时效关系；通过低、中、高三个感染剂量组生殖道灌注造成BALB/c小鼠的感染,测定了感染后3、7、14、21、28天多项指标,包括体重等临床指标；病理学检测；阴道和宫颈的拭子样品的衣原体分离培养；宫颈组织样品的核酸定量分析;血清抗体和IFN-γ、IL-2、IL-10等细胞因子的测定,以此建立标准化的模型评价指标体系。 OMP1基因(class 1 outer membrane protein gene)是衣原体病原体特异的基因,我们以此基因为靶基因测定衣原体在感染组织中的数量,了解病原复制与其他指标的相互关系,实验中采用蛋白裂解和盐析沉淀的方法提取组织样品的DNA,建立了Real time PCR体系,在体系中排除了小鼠基因组的干扰,可以定量精确组织样品中的衣原体数量。此方法提高了衣原体检测的敏感性和特异性。 我们的研究首先确定了体外衣原体的复制规律,制备了纯度较高的感染用衣原体。三种剂量感染小鼠后的宫颈拭子均可以分离得到衣原体病原体,组织核酸定量确定了衣原体在感染组织的复制和增殖。感染小鼠的临床指标和病理分析也确证了衣原体感染的临床和病理变化。在分析了感染小鼠的外周血后发现小鼠的抗衣原体抗体在第2周开始增高,之后抗体水平维持平稳状态。IFN-γ、IL-2和IL-10的变化表明了小鼠在感染衣原体后机体出现了针对病原体的不同免疫反应及相关因子的变化。 本研究构建了稳定的人型株沙眼衣原体小鼠下生殖道感染模型,其中中、高剂量感染组在病原学、病理学指标上与人感染后临床表现高度相似,感染均以宫颈炎为主,伴随轻度的阴道炎,但在免疫学指标上与人感染后有差异,小鼠模型感染后的自然清除时间较短,只能引起短暂的下生殖道感染。 通过模型构建过程中的标准化研究,我们确立了衣原体体外扩增培养、核酸定量、感染接种、感染后取材以及感染后检测包括病原学、病理学和免疫学在内的多项指标的方法,分析了不同感染剂量对于这些指标的影响,初步建立了标准化的操作规程(SOP),这些可以为今后建立各类衣原体生殖道感染模型提供一定的依据。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R-332

【参考文献】

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本文编号：1592267