不同鼠类宿主对伯氏疟原虫易感性的研究

发布时间：2018-04-02 04:08

本文选题：伯氏疟原虫　切入点：细胞免疫　出处：《蚌埠医学院》2016年硕士论文

【摘要】：目的:建立不同鼠类宿主易感性的实验动物模型,观察不同鼠类宿主易感性的差异,探讨造成鼠类宿主易感性差异的机制。方法:(1)昆明小鼠、BALB/c小鼠、SD大鼠分为正常对照组和感染第1、3、5、7、9天组,感染组分别腹腔注射1×106个P.b(SD大鼠注射1×107个P.b),每组10只。(2)记录不同鼠类宿主的原虫血率、生存率以及脾脏湿重。(3)流式细胞术检测正常对照组和感染组外周血CD4+、CD8+、NK、NKT细胞比例变化。(4)ELISA法检测正常对照组和感染组外周血ARG、IFN-γ、IL-4含量的变化。(5)使用NO、NOS合酶检测试剂盒检测正常对照组和感染组外周血NO、NOS合酶含量的变化。(6)实时荧光定量PCR法检测正常对照组和感染组外周血TLR4、TLR9相对表达的变化。结果:1.昆明小鼠组和BALB/c小鼠组在感染P.b后原虫血率逐渐升高,最后全部死亡,而SD大鼠组在感染P.b第5天达到高峰,随后原虫血症逐渐消失。3种鼠类宿主分别与其正常对照组比较,昆明小鼠感染第1、3、5、7、9天组脾脏重量显著大于正常对照组(P0.01);BALB/c小鼠感染第1天组无统计学差异,感染第3、5、7、9天组脾脏重量显著大于正常对照组(P0.01);SD大鼠感染第1天组无统计学差异,感染第3、5、7、9天组脾脏重量大于正常对照组(P0.05)。2.昆明小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5天外周血CD4+T淋巴细胞比例升高(P0.05),感染第7天外周血CD4+T淋巴细胞比例降低(P0.05),感染第9天无统计学差异;感染P.b第1、3、5外周血CD8+T淋巴细胞比例降低(P0.05),感染第7天CD8+T淋巴细胞比例升高(P0.05),感染第9天无统计学差异。BALB/c小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1、3天CD4+T淋巴细胞比例升高(P0.05),感染第7天CD4+T淋巴细胞比例降低(P0.05),感染第5、9天外周血CD4+T淋巴细胞比例无统计学差异;感染P.b第1、3天CD8+T淋巴细胞比例降低(P0.05),感染第7天CD8+T淋巴细胞比例升高(P0.05),感染第5、9天无统计学差异。SD大鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1天外周血CD4+T淋巴细胞比例升高(P0.05),感染P.b第3、5、7、9天外周血CD4+T淋巴细胞无统计学差,感染P.b第1天外周血CD8+T淋巴细胞比例降低(P0.05),感染P.b第3、5、7、9天外周血CD8+T淋巴细胞比例无统计学差异。3.昆明小鼠外周血NK、NKT细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5天外周血NK细胞比例升高(P0.05),第7天无统计学差异,第9天外周血NK细胞比例降低(P0.05);感染P.b第1、5天外周血NKT细胞比例无统计学差异,第3天外周血NKT细胞比例升高(P0.05),第7、9天外周血NKT细胞比例显著降低(P0.01)。BALB/c小鼠外周血NK、NKT细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1、7天外周血NK细胞比例无统计学差异,第3、5天外周血NK细胞比例升高(P0.05),第9天外周血NK细胞比例显著降低(P0.01);感染P.b第1天外周血NKT细胞比例无统计学差异,第3天外周血NKT细胞比例升高(P0.05),第5,7,9天外周血NKT细胞比例降低(P0.05).SD大鼠外周血NK、NKT细胞比例与正常对照组比较,感染P.b第1天外周血NK细胞比例升高(P0.05),第3天外周血NK细胞比例显著升高(P0.01),第5、7天外周血NK细胞比例升高(P0.05),第9天外周血NK细胞比例无统计学差异;感染第1天外周血NKT细胞比例升高(P0.05),第3、5、7、9天外周血NKT细胞比例均显著升高(P0.01)。4.昆明小鼠组NO、NOS、Arginase值与正常对照组比较,感染P.b第1天血清NO值显著升高(P0.01),第3、5天无统计学差异,第7、9天血清NO值降低(P0.05);感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS无统计学差异;感染P.b第1天血清Arginase值降低(P0.05),第3、5、7、9天血清Arginase值无统计学差异。BALB/c小鼠组NO、NOS、Arginase值与正常对照组比较,感染P.b第1天血清NO值显著升高(P0.01),第3、5天血清NO值无统计学差异,第7、9天血清NO值降低(P0.05);感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS值无统计学差异;感染P.b第1、3天血清Arginase值降低(P0.05),第5、7、9天血清Arginase值无统计学差异。SD大鼠组NO、NOS、Arginase值与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5、7、9天血清NO值显著升高(P0.01);感染P.b第1、3、5、7、9天血清NOS无统计学差异;感染P.b第1、3、5、7、9天血清Arginase值均降低(P0.05)。5.昆明小鼠组血清IFN-γ、IL-4相对表达值与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5天血清IFN-γ值升高(P0.05),第7、9天血清INF-γ值无统计学差异;感染P.b第1天血清IL-4值无统计学差异,第3、5、7、9天血清IL-4值升高(P0.05)。BALB/c小鼠组血清IFN-γ、IL-4与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5天血清IFN-γ值升高(P0.05),第7、9天血清IFN-γ值无统计学差异;感染P.b第1天血清IL-4值无统计学差异,第3、5、7、9天血清IL-4值显著升高(P0.01)。SD大鼠组血清IFN-γ、IL-4与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5、7天血清IFN-γ升高(P0.05),第9天血清IFN-γ无统计学差异;感染P.b第1、3天血清IL-4无统计学差异,第5、7、9天血清IL-4值升高(P0.05)。6.BALB/c小鼠TLR4、TL9相对表达值与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5、7天TLR4相对表达显著升高(P0.01),第9天TLR9相对表达下降(P0.05);感染P.b第1、3天TLR9相对表达无统计学差异,第5天TLR9相对表达显著升高(P0.01),第7天TLR9相对表达下降(P0.05),第9天TLR9相对表达显著下降(P0.01)。SD大鼠TLR4、TLR9相对表达值与正常对照组比较,感染P.b第1、3、5、7天TLR4相对表达显著升高(P0.01),感染P.b第9天TLR4相对表达无统计学差异;感染P.b第1、3、5、7、9天TLR9相对表达均显著升高(P0.01)。结论:(1)本实验证实不同鼠类宿主存在易感性差异的现象,昆明小鼠和BALB/c小鼠无法控制感染而最终死亡,SD大鼠能有效清除疟原虫且最终自愈。(2)早期IFN-γ大量的表达以及CD4+T淋巴细胞的比例上升提示Th1类免疫应答反应在抗疟原虫感染过程中起重要作用。(3)昆明小鼠和BALB/c小鼠的NK、NKT细胞比例先升高后降低,而SD大鼠NK细胞比例升高后维持稳定,NKT细胞比例持续升高,提示大鼠的NK、NKT细胞在清除疟原虫过程中起到重要作用,这也许是造成其易感性差异的原因之一(4)昆明小鼠和BALB/c小鼠NO值先升高后降低,而SD大鼠NO值持续升高,提示大鼠的NO在清除疟原虫中起到作用。(5)BALB/c小鼠TLR4和TLR9相对表达先升高后降低,而SD大鼠TLR4相对表达升高后降低,TLR9相对表达持续升高,提示TLR9相对表达的差异可能是造成疟原虫易感性差异的原因之一。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R382

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