去甲肾上腺素对培养的背根神经节神经元P物质释放的调节作用

发布时间：2018-04-02 04:37

本文选题：去甲肾上腺素　切入点：肾上腺素能受体　出处：《山东大学》2012年硕士论文

【摘要】：在组织损伤或炎症状态下,去甲肾上腺素能神经的可塑性变化会影响其对抗伤害性刺激的效能。在生理和病理条件下,去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)是激活肾上腺素能受体的关键神经递质。有趣的是,α1-肾上腺素能受体和α2-肾上腺素能受体在背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)初级传入神经元都有表达并且调节神经源性炎症和伤害性刺激反应。在体外培养的大鼠DRG神经元中,NA可以通过激活α1-肾上腺素能受体而非α2-肾上腺素能受体来抑制热激活的K+通道电流。NA的释放可参与调节伤害感受性刺激。P物质(substance P,SP)是一个含11个氨基酸的神经肽,存在于支配周围组织的感觉神经内,可参与炎症反应和伤害感受性刺激的调节。对伤害感受性刺激作出反应的DRG初级传入神经元具有表达SP的特征。SP的释放可激活上行感觉神经元将痛觉信号从周围神经系统(peripheral nervous system, PNS)传递到中枢神经系统(central nervous system, CNS)。SP从周围神经末梢的释放会引起神经源性炎症。很多因素或物质会引起SP释放而导致神经源性炎症。有实验证实α1-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素会引起辣椒素(capsaicin, CAP)敏感感觉神经末梢释放P物质。由注射CAP引起的神经源性炎症和疼痛取决于对交感传出神经释放NA的反应。激活或抑制α-肾上腺素能受体是否会影响DRG神经元SP的表达和释放目前仍不清楚。本研究建立胎鼠DRG神经元分散培养的模型,用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)分析技术、蛋白质印迹法(Western blot assay)、免疫荧光双标技术和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELIS A),研究α-肾上腺素能受体激动剂NA和α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对体外培养的DRG神经元SP的表达和释放的影响作用。本课题的研究结果如下：(1)RT-PCR分析结果显示,培养液中加入α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对DRG神经元编码SP的前速激肽原(preprotachykinin, PPT) mRNA的表达水平没有显著影响。(2)蛋白质印迹法分析结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对DRG神经元SP的表达水平没有显著影响。(3)免疫荧光双标技术研究结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌哗嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对表达SP的神经元比率没有显著影响。(4)ELISA分析结果显示,α-肾上腺素能受体激动剂NA、α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪和α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾对SP的基础释放量没有显著影响；而NA可增加CAP诱发的SP释放量,哌哗嗪预处理能够减少由NA导致的CAP诱发的SP释放量的增加,育亨宾对NA诱导增加的CAP诱发的SP释放无明显作用。以上结果表明,NA对DRG神经元SP蛋白水平和mRNA水平的表达均无明显影响作用；NA对DRG神经元SP的基础释放量没有显著影响；NA能够促进CAP诱发的SP释放,而这一作用是通过激活α1-肾上腺素能受体而发挥作用的,这可能是NA与疼痛调节作用有关的机制之一。这一研究结果为进一步研究NA在神经源性炎症状态下对痛觉信号传导的调节作用及其机制提供了一定的实验依据。
[Abstract]:In rat DRG neurons cultured in vitro , NA can inhibit the activation of K + channel currents through activation of 伪 1 - adrenergic receptors rather than 伪 2 - adrenergic receptors . The release of NA can be involved in the regulation of injury - sensitive stimuli . P - substance ( substance P , SP ) is

A neuropeptide containing 11 amino acids , which is present in the sensory nerves innervating the surrounding tissues , can be involved in the regulation of inflammatory responses and injury - sensitive stimuli . The DRG primary afferent neurons that respond to injury - sensitive stimuli have the characteristic of expressing the SP . The release of the SP activates the ascending sensory neuron to transfer the pain signal from the peripheral nervous system ( PNS ) to the central nervous system ( CNS ) . The results showed that 伪 - adrenergic receptor agonist NA , 伪 1 - adrenergic receptor antagonist pethidine and 伪 2 - adrenergic receptor antagonist yohimbine did not significantly affect the expression level of SP in DRG neurons .
The results showed that NA had no significant effect on the level of SP protein and mRNA level in DRG neurons .
NA had no significant effect on the basal release of SP in DRG neurons ;
NA can promote the release of CAP - induced SP , which plays a role in activation of 伪 1 - adrenergic receptors , which may be one of the mechanisms involved in the regulation of NA and pain .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

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