靶向干扰五种基因对PC12细胞增殖的影响

发布时间：2018-04-17 23:20

本文选题：RNA干扰 + PC12细胞　；参考：《昆明医学院》2011年硕士论文

【摘要】：[目的]研究磷酸吡哆醛激酶(pyridoxal kinase, PDXK)、电压依赖性阴离子通道2(VDAC2, voltage-dependent anion channels 2)、鸟苷酸解离抑制因子α(RhoGDP dissociation inhibitor, RhoGDI-α)、原肌球蛋白4(tropomyosin 4, TM4)、β-突轴核蛋白(β-synuclein,β-sncb)在PC12细胞生长中的作用。 [方法]化学合成三条分别针对PDXK、VDAC2、RhoGDI-α、TM4、β-sncb五个基因的siRNA序列(Si-r-PDXK_K1、2、3, Si-r-VDAC2_1、2、3, Si-r-RhoGDI-a_1、2、3, Si-r-TM4_1、2、3, Si-r-β-sncb_1、2、3),同时化学合成一条随机阴性序列对照siRNA SCR(scramble siRNA);使用阳离子脂质体Lipofectamine2000TM作为转染试剂,将PDXK、VDAC2、RhoGDI-α、TM4、β-sncb基因的siRNA转染入大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞),RT-PCR技术筛选出最佳干扰序列；24h时用免疫细胞化学染色观察细胞内五种蛋白表达情况、MTT法检测五种基因干扰对PC12细胞增殖和细胞形态及数量的影响。 [结果] 1、PDXK基因干扰结果：Si-r-PDXK_1组与siRNA SCR组相比,PDXK mRNA表达明显被抑制,胞浆内PDXK蛋白表达明显下降,而Si-r-PDXK_2组和Si-r-PDXK_3组与siRNA SCR组相比PDXK mRNA表达未被抑制(P0.05),说明Si-r-PDXK_1能有效干扰靶基因PDXK表达水平。MTT检测及细胞计数结果显示Si-r-PDXK_1组终浓度为80nM、100nM组细胞活力明显降低且细胞数量明显减少(P0.05)。 2、VDAC2基因干扰结果：与siRNA SCR组相比,Si-r-VDAC2_1、2、3各浓度组VDAC2 mRNA均表达明显被抑制(P0.05); MTT检测结果显示Si-r-VDAC2_1终浓度为100nM、Si-r-VDAC2_3终浓度为50nM组别细胞活力与siRNA SCR组细胞活力相比均减低(P0.05)；细胞计数结果显示Si-r-VDAC2 3终浓度为50nM与siRNA SCR组细胞数比较,Si-r-VDAC2_3终浓度为50nM组别细胞数量明显减少(P0.05)。 3、RhoGDI-α基因干扰结果：与siRNA SCR组比较,Si-r-RhoGDI-α_1终浓度为50nM、100nM, Si-r-RhoGDI-α_2终浓度为100nM, Si-r-RhoGDI-α_3终浓度为50nM、100nM对RhoGDI-αmRNA表达均具有抑制作用(P0.05)；但Si-r-RhoGDI-a_1、2、3干扰对细胞活力及细胞数量无明显影响(P0.05)。 4、TM4基因干扰结果：与siRNA SCR组比较,Si-r-TM4_2终浓度为80nM及Si-r-TM4_3终浓度为50nM、80nM、100nM对TM4 mRNA的表达具有抑制作用(P0.05)；MTT检测结果提示Si-r-TM4_1终浓度为50nM组和Si-r-TM4_3终浓度为80nM及100nM组细胞活力与siRNA SCR组细胞活力相比均减低(P0.05)。细胞计数结果提示Si-r-TM4_1终浓度为50nM、80nM及Si-r-TM4_3终浓度为50nM、80nM、100nM与siRNA SCR组比较,细胞数量明显减少(P0.05)。 5、β-sncb基因干扰结果：MTT检测结果提示,Si-r-β-sncb_2终浓度为50nM组别及Si-r-β-sncb_3终浓度为100nM组别细胞活力与siRNA SCR组细胞活力相比均减低(P0.05)；细胞计数结果提示Si-r-β-sncb_3终浓度为80nM与siRNASCR组比较,数量明显减少(P0.05)。 [结论] 特异性siRNA在相应干扰序列和相应浓度下,可有效降低PC12细胞PDXK、VDAC2、RhoGDI-a、TM4、β-sncb基因表达,其中PDXK、VDAC2、TM4、β-sncb表达降低后可明显抑制PC12细胞增殖及生长。然而尽管RhoGDI-a基因被有效干扰,但对PC12细胞生长没有明显影响。本实验不仅建立了体外RNA干扰技术,而且利用该技术发现四种基因能影响PC12细胞存活及生长,从而为研究损伤状态下这些基因的体内功能提供了前期实验证据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R346

【参考文献】