葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞白介素-18表达的影响及其机制初探

发布时间：2018-06-06 14:34

  本文选题：MP + 白介素-18　； 参考：《蚌埠医学院》2012年硕士论文

【摘要】：研究目的 通过研究不同浓度的葡萄糖(glucose,GLU)和糖波动环境下，小鼠腹腔巨噬细胞(mouseperitonealmacrophages,MPM)白介素-18(interleukin-18,IL-18)mRNA表达及分泌情况、不同培养时间对高浓度GLU(highglucose,HG)环境下MPM的IL-18mRNA表达及IL-18分泌量变化的影响、不同浓度的JNK通路抑制剂对HG状态下MPM的IL-18mRNA表达及IL-18分泌量影响，以探讨DM时MPM参与DM大血管病变的机制。 研究方法 1分离纯化的MPM随机分为6组：1组、2组、3组、4组、5组（GLU浓度分别为4.0mmol/L、8.0mmol/L、16.0mmol/L、24.0mmol/L和32.0mmol/L）和GLU浓度波动组（GLU浓度8.0mmol/L1.5小时-24.0mmol/L1.5小时-16.0mmol/L1.5小时-32.0mmol/L1.5小时）。利用半定量逆转录聚合酶链反应技术(reverse-transcription-polymerchainreaction,RT-PCR）和酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)技术分别检测各组MPM的IL-18mRNA的表达情况和IL-18的分泌量。 2把分离纯化的MPM随机分为4组在32.0mmol/LGLU浓度下培养，在3h、6h、12h和18h时间点下。使用半定量RT-PCR方法和ELISA法分别检测各组MPM的IL-18mRNA的表达及IL-18的分泌量。 3分离纯化MPM，根据c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)通路抑制剂SP600125的浓度随机分为4组:阴性对照组，5μmol/L组，10μmol/L组，15μmol/L组。在32.0mmol/LGLU浓度下，使用半定量RT-PCR方法和ELISA法分别检测各组MPM的IL-18mRNA的表达和IL-18的分泌量。 研究结果 1HG促进MPM的IL-18表达。MPM的在GLU含量为4mmol/L的RPMI1640培养基中表达很少，IL-18/-actin的比值为0.13±0.04；在8mmol/LGLU组，16mmol/LGLU组、24mmol/LGLU组和32mmol/LGLU组IL-18表达逐渐升高，各组IL-18分泌具有统计学差异(P0.05)。在含32mmol/LGLU的1640培养液中孵育6小时，其IL-18/-actin的比值达1.04±0.03，可见HG促进MPM的IL-18的表达；在GLU波动组，IL-18/-actin的比值为0.78±0.05，较32mmol/LGLU组低，差异有统计学意义（（P0.001)，较≤24mmol/L各GLU浓度组高，差异具有统计学意义（P0.05)。各组IL-18分泌量变化的趋势与各组IL-18mRNA表达的变化趋势一致，组间比较均有统计学意义(P0.05)。 2HG培养下的MPM的IL-18表达变化与培养时间的关系。3h组、6h组和12h组相对灰度值IL-18/β-actin分别为0.78±0.07、1.04±0.02和1.22±0.05，各组差异有统计学意义（P0.01)。在培养18h时，相对灰度值IL-18/β-actin为0.59±0.07，差异有统计学意义（P0.001)。各组IL-18分泌量变化的趋势与各组IL-18mRNA表达的变化趋势一致，组间比较均有统计学意义(P0.01)。 3SP600125对HG培养的MPM的IL-18mRNA基因表达及分泌量的影响。在0μmol/L组，5μmol/L组，10μmol/L组，15μmol/L组相对灰度值IL-18/β-actin分别为1.22±0.03、1.03±0.05、0.74±0.07和0.57±0.08。组间比较差异均有统计学意义（P0.01)。各组IL-18分泌量变化的趋势与各组IL-18mRNA表达的变化趋势一致，组间比较均有统计学意义(P0.05)。 研究结论 1HG促进MPM的IL-18表达和分泌。波动的GLU浓度对IL-18表达和分泌有重要影响。 2在12h内，，随时间延长，HG环境下MPM的IL-18的表达和分泌增加，在12小时后随时间下降。 3JNK通路可能是HG培养的MPM的IL-18表达和分泌的机制环节之一。
[Abstract]:Purpose of study

The expression of interleukin - 18 ( IL - 18 ) mRNA and secretion of interleukin - 18 ( IL - 18 ) in peritoneal macrophages of mice were studied by studying the expression of interleukin - 18 ( IL - 18 ) mRNA and secretion of interleukin - 18 ( IL - 18 ) in mice with different concentrations of glucose ( GLU ) and sugar . The effects of different culture time on the expression of IL - 18 mRNA and IL - 18 secretion in high concentration GLU ( highglucose , HG ) were studied .

Research Methods

The levels of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were measured by reverse transcription polymerase chain reaction ( RT - PCR ) and enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) .

The expression of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were measured by semi - quantitative RT - PCR and ELISA .

The expression of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were determined by semi - quantitative RT - PCR and ELISA respectively at the concentration of 32.0mmol / L GLU .

Results of the study

The expression of IL - 18 was promoted by 1HG . The expression of IL - 18 / - actin was 0.13 卤 0.04 in RPMI1640 medium with GLU content of 4mmol / L .
The expression of IL - 18 / - actin was 1.04 卤 0.03 in 16mmol / L GLU group , 16 mmol / L GLU group , 24 mmol / L GLU group and 32 mmol / L GLU group , and the IL - 18 / - actin ratio of IL - 18 / - actin was 1.04 卤 0.03 , and the expression of IL - 18 was promoted by HG .
In the GLU wave group , the ratio of IL - 18 / - actin was 0.78 卤 0.05 , lower than that of 32mmol / L GLU group ( P < 0.01 ) .

The levels of IL - 18 / 尾 - actin were 0.78 卤 0.07 , 1.04 卤 0.02 and 1.22 卤 0.05 respectively in the 3h , 6h and 12h groups .

The levels of IL - 18 / 尾 - actin were 1.22 卤 0.03 , 1.03 卤 0.05 , 0.74 卤 0.07 and 0.57 卤 0.08 respectively in the 0 渭mol / L group , 5 渭mol / L group , 10 渭mol / L group , 15 渭mol / L group , and 0 . 74 卤 0.07 and 0.57 卤 0.08 , respectively .

Conclusions of the study

The expression of IL - 18 and secretion of IL - 18 were promoted by 1HG , and the concentration of GLU was significantly affected by the expression and secretion of IL - 18 .

2 In 12 hours , the expression and secretion of IL - 18 increased with time , and decreased with time after 12 hours .

The 3PK pathway may be one of the mechanisms involved in the expression and secretion of IL - 18 in HG - cultured MPGs .
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

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本文编号：1986959