大鼠不同部位来源脂肪源性干细胞的增殖能力比较及CM-Dil体外标记研究

发布时间：2018-06-27 01:06

  本文选题：脂肪源性干细胞 + SD鼠　； 参考：《大连医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：观察比较SD大鼠不同部位脂肪源性干细胞体外培养的增殖能力；探讨荧光性染料CM-Dil体外标记ADSC的可行性与时效性。 方法：无菌条件下依次切取SD大鼠腹股沟区、附睾区脂肪组织，Ⅰ型胶原酶消化获取脂肪源性干细胞，体外行差速贴壁培养传代。观察腹股沟区（A组）与附睾区（B组）单位体积（1ml）脂肪相同方法下提取的干细胞数量、细胞生长繁殖情况及形态变化，绘制各自生长曲线。取汇合至80%的第三代（P3）附睾来源脂肪源性干细胞，分为实验组（a、b、c组）和对照组（d组）。各实验组使用不同浓度的CM-Dil标记液体外标记ADSC，分别为a组（20μg/ml）、b组（30μg/ml）、c组（40μg/ml）。空白对照组（d组）无CM-Dil标记及其他特殊处理，体外行差速贴壁培养并传代。观察并比较两组细胞形态，绘制各实验组与对照组的细胞生长曲线，计算a、b、c三组细胞24小时的标记率，分析此标记方法的可行性。观察期限25天，计算不同时间点a、b、c组细胞的标记率，组组间进行统计学分析，探讨其时效性。 结果：①在倒置相差显微镜下观察，，A、B两组脂肪源性干细胞均呈短小梭形，随培养时间延长，细胞逐渐变得细长，两者的细胞形态均与成纤维细胞相似；②同样消化方法下获取的A组（腹股沟区）细胞数量为（1.03士0.19）×10~3个，B组(附睾区)细胞数量为（2.08士0.15）×10~3，两者存在显著统计学差异(P0.05)；③A、B两组ADSC的生长曲线均呈“S”形，B组（附睾区）ADSC的的增殖能力高于A组（腹股沟区）；④不同浓度CM-Dil标记液（a组：20μg/ml、b组：30μg/ml、c组：40μg/ml）24h的标记率分别为：（98.16士0.31）%、（98.93士0.77）%、（98.09士0.50）%，组组间无显著统计学差异（P0.05）；⑤实验组（20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml）与对照组的细胞生长曲线均呈“S”形，其中20μg/ml和30μg/ml的标记浓度对细胞的增殖能力及活力无明显影响。⑥细胞传至第8代（25d）时，c组（40μg/ml）的阳性标记率仍可达到（74.37士1.68）%，与a组（20μg/ml）标记率（67.59士2.53%）存在显著统计学差异（P0.05）。 结论： 1、大鼠附睾区脂肪组织所含ADSC在获取数量、细胞活力、体外增殖能力方面要优于腹股沟区ADSC，可作为种子细胞来源的理想供区。 2、采用CM-Dil对ADSC进行体外标记具有可行性，20μg/ml、30μg/ml的标记浓度对细胞的增殖能力及活力无明显影响。 3、不同浓度CM-Dil在短期内对ADSC的标记率无明显影响，40μg/ml浓度可维持在3周以上。
[Abstract]:Aim: to observe and compare the proliferative ability of adipose derived stem cells from different parts of SD rats in vitro and to explore the feasibility and timeliness of labeling ADSC with fluorescent dye CM-Dil in vitro. Methods: adipose-derived stem cells were obtained by digesting adipose tissue in inguinal and epididymal regions of SD rats under aseptic condition. The adipose-derived stem cells were obtained by collagenase 鈪

本文编号：2072084