固有免疫细胞AIM2炎性体通路在抗HCMV免疫机制中的作用

发布时间：2018-07-06 18:33

  本文选题：人巨细胞病毒 + 固有免疫　； 参考：《华中科技大学》2011年博士论文

【摘要】：[目的] ①证实AIM2是识别HCMV的DNA感受器； ②明确HCMV感染THP-1源性巨噬细胞对AIM2炎性体通路中各信号分子的影响； ③证实AIM2炎性体通路参与抗HCMV固有免疫促炎细胞因子反应。 [方法] ①建立HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型：HCMV (AD169株)以MOI=1接种至已用PMA刺激分化的THP-1细胞,建立HCMV感染THP-1源性巨噬细胞模型,同时设立模拟感染对照组、LPS+ATP对照组和poly(dA:dT)对照组； ②Real-time RT-PCR法定量检测HCMV感染组和模拟感染对照组DNA感受器AIM2、polⅢ、DAI和TLR9基因转录水平； ③Real-time RT-PCR法定量检钡HCMV感染组和模拟感染对照组IL-1β基因转录强度； ④在HCMV感染后1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,用western blot法检测HCMV感染组、模拟感染对照组和LPS+ATP对照组AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达变化；并设立转染poly(dA:dT)后24 h的poly(dA:dT)对照组； ⑤用针对AIM2和ASC的siRNA,分别转染THP-1源性巨噬细胞,转染后24 h再感染HCMV AD 169毒株,并设模拟转染对照组。在感染后6 h,用Western blot法检测细胞内AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白表达,并与模拟感染对照组比较； ⑥用特异性Caspase-1抑制剂(Ac-YVAD-CHO)处理THP-1源性巨噬细胞后,再感染HCMV AD 169毒株,同时设模拟处理对照组,在感染后6 h,用Western blot检测细胞内ASC、Caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平,并与模拟感染对照组计较。 [结果] HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后6 h可引起DNA感受器AIM2、PolⅢ、DAI基因高表达,而TLR9变化不明显； ②HCMV感染THP-1源性巨噬细胞后6 h引起促炎细胞因子IL-1β基因高表达； ③HCMV感染THP-1源性巨噬细胞引起AIM2炎性体相关蛋白AIM2、ASC和Caspase-1时序性高表达； ④HCMV感染THP-1源性巨噬细胞诱导促炎细胞因子IL-1β蛋白高表达； ⑤AIM2 siRNA可抑制HCMV诱导的AIM2炎性体相关蛋白AIM2.Caspase-1和IL-1β的高表达,但对ASC蛋白表达无影响； ⑥ASC siRNA可抑制HCMV引起AIM2炎性体相关蛋白ASC.Caspase-1和IL-1β的高表达,但对AIM2蛋白表达无影响； ⑦特异性Caspase-1抑制剂Ac-YVAD-CHO对HCMV诱导的AIM2炎性体蛋白AIM2. ASC和Caspase-1及pro-IL-1β的表达都无影响,但可抑制HCMV感染所致的成熟IL-1β蛋白表达升高。 [结论] ①AIM2是胞质内免疫识别HCMV dsDNA的DNA感受器； ②HCMV感染可诱导AIM2炎性体通路AIM2.ASC和Caspase-1蛋白高表达； ③HCMV感染可引起促炎细胞因子IL-1β蛋白高表达； ④AIM2炎性体通路参与抗HCMV固有免疫反应中IL-1β的成熟和活化。
[Abstract]:[objective] 1 to confirm that AIM2 is a DNA receptor that recognizes HCMV, 2 to clarify the effect of HCMV infection on signal molecules in AIM2 inflammatory pathway by THP-1 derived macrophages. 3 it was confirmed that AIM2 inflammatory pathway was involved in anti-HCMV innate immune proinflammatory cytokine response. [methods] 1 HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established by inoculating with MOI1 to THP-1 cells stimulated by PMA, and HCMV infected THP-1 derived macrophage model was established. The transcriptional levels of AIM2Pol 鈪，

本文编号：2103727