携带hBMP-2的可诱导慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的成骨研究

发布时间：2018-09-17 15:14

【摘要】：目的：：观察携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体对人脐带间充质干细胞转染表达及稳定转染后成骨的影响。 方法：取第3代人脐带间充质干细胞分组培养：实验组稳定转染携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体,并加入10m/L强力霉素；未加强力霉素组：同实验组但不加强力霉素；空病毒组转染携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体；空白对照组未进行任何处理。 结果：①骨形态发生蛋白2表达：实验组、未加强力霉素组均有表达,且实验组表达量高于未加强力霉素组(P0.05)；空病毒组、空白对照组未见表达。②碱性磷酸酶染色：实验组可见细胞胞浆中出现大量红色或红棕色颗粒,未加强力霉素组可见少量红色颗粒,实验组碱性磷酸酶活性高于未加强力霉素组(P0.05)；空病毒组、空白对照组未见明显红色颗粒。③茜素红染色：实验组、未加强力霉素组均可见钙结节形成,实验组较未加强力霉素组矿化结节数量多,面积更大；空病毒组、空白对照组未见明显矿化结节形成。 结论：携带hBMP-2的tet-on慢病毒载体成功转染人脐带间充质干细胞,并可获得稳定转染HUCMSCs。强力霉素可使稳定转染HUCMSCs的hBMP-2表达量显著升高,成骨能力显著增强,为进一步研究hBMP-2诱导HUCMSCs成骨分化治疗骨坏死和骨缺损奠定实验基础。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of tet-on lentivirus vector carrying bone morphogenetic protein 2 on the expression of human umbilical cord mesenchymal stem cells and osteogenesis after stable transfection. Methods: the third generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured in groups: the tet-on lentivirus vector carrying bone morphogenetic protein 2 was transfected stably in the experimental group, and the 10m/L doxycycline was added to the lentivirus vector, and the doxycycline group was not added with doxycycline in the same experimental group. The empty virus group transfected the lentivirus vector carrying green fluorescent protein, and the blank control group was not treated. Results the expression of bone morphogenetic protein-2 in the experimental group was higher than that in the doxycycline group (P0.05), and the expression level in the control group was higher than that in the control group (P0.05). In the blank control group, the expression of .2 alkaline phosphatase was not observed. In the experimental group, a large number of red or red-brown granules were found in the cytoplasm of the cells, and a few red granules were observed in the group without doxycycline. The activity of alkaline phosphatase in the experimental group was higher than that in the group without doxycycline (P0.05); in the empty virus group, there was no obvious red particle alizarin red staining in the blank control group. The number and area of mineralized nodules in the experimental group were more than those in the control group, while in the empty virus group, there were no obvious mineralized nodules in the blank control group. Conclusion: tet-on lentivirus vector carrying hBMP-2 was successfully transfected into human umbilical cord mesenchymal stem cells, and stable transfection of HUCMSCs. could be obtained. Doxycycline could significantly increase the expression of hBMP-2 and enhance the osteogenic ability of stable transfected HUCMSCs, which laid the experimental foundation for the further study of osteogenic differentiation of HUCMSCs induced by hBMP-2 in the treatment of osteonecrosis and bone defect.
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

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本文编号：2246308