人Tudor-SN蛋白参与RNA颗粒形成的机制探讨

发布时间：2018-12-15 16:00

【摘要】：目的：人Tudor-SN蛋白是一种广泛表达于胞浆中的多功能RNA结合蛋白,它可以参与细胞内多种生物学过程。应激颗粒(Stress Granules, SGs)是存在于胞浆中的含有mRNA的颗粒结构,它是在细胞应答应激时聚集产生的。研究发现Tudor-SN蛋白在应激刺激下可以与G3BP蛋白产生细胞内共定位。因此本课题旨在研究Tudor-SN蛋白如何参与SGs以及胞浆中另一类RNA颗粒即加工小体(Processing-bodies, P-bodies)的聚集功能,从而探讨Tudor-SN蛋白在mRNA的转录后基因调控过程中的作用机制。 方法：本课题实验分为四部分,第一部分是利用免疫荧光抗体染色技术研究Tudor-SN参与SGs的聚集并与TIA-1蛋白的细胞内定位；第二部分实验利用同样的实验方法研究Tudor-SN参与P-bodies的聚集并与Ago2蛋白和Dcp-1蛋白的细胞内定位；第三部分实验利用siRNA干扰技术和免疫荧光抗体染色技术研究RNAi后的Tudor-SN低表达对于SGs形成的影响。第四部分实验是利用免疫荧光抗体染色技术研究Tudor-SN蛋白在参与SGs聚集过程中的动态运输过程。 结果：1.Tudor-SN蛋白在应激刺激下参与SGs的聚集并通过其SN domain与TIA-1蛋白存在细胞内共定位,但是Tudor-SN蛋白聚集到SGs的过程滞后于TIA-1。2.Tudor-N蛋白在应激刺激下参与P-bodies的聚集并与Ago2蛋白和Dcp1蛋白分别形成细胞内共定位。3.RNAi后的细胞内Tudor-SN蛋白低表达不会阻止SG聚集,但会影响SGs的致密程度和大小。4.Tudor-SN蛋白在参与SGs形成过程中依赖于微管蛋白(Microtubules)——α-Tubulin。 结论：Tudor-SN蛋白作为一种RNA结合蛋白不仅可以参与SGs的聚集,也可以参与P-bodies的聚集,是被新发现的RNA颗粒共享蛋白组分,并在应答应激时可以与SGs的标志蛋白TIA-1及P-bodies的标志蛋白Dcp1产生细胞内共定位。但它并不是SGs聚集的启动蛋白组分,它在应激条件下聚集到SGs的过程依赖于微管蛋白α-Tubulin的支持和引导作用。
[Abstract]:Aim: human Tudor-SN protein is a multifunctional RNA binding protein widely expressed in cytoplasm. Stress particle (Stress Granules, SGs) is a mRNA-containing granular structure in the cytoplasm. It is produced when the cell responds to stress. It was found that Tudor-SN protein could co-locate with G3BP protein under stress stimulation. Therefore, the purpose of this study was to investigate how Tudor-SN proteins participate in the aggregation of SGs and another type of RNA particles in the cytoplasm, that is, the processing body (Processing-bodies, P-bodies). To explore the role of Tudor-SN protein in the posttranscriptional gene regulation of mRNA. Methods: the experiment was divided into four parts. The first part was to study the role of Tudor-SN in the aggregation of SGs and the intracellular localization of TIA-1 protein by immunofluorescence antibody staining. In the second part, the same method was used to study the role of Tudor-SN in the aggregation of P-bodies and the intracellular localization of Ago2 protein and Dcp-1 protein. In the third part, siRNA interference technique and immunofluorescence antibody staining were used to study the effect of low expression of Tudor-SN after RNAi on the formation of SGs. In the fourth part, immunofluorescence antibody staining was used to study the dynamic transport of Tudor-SN protein in the process of SGs aggregation. Results: 1.Tudor-SN protein was involved in the aggregation of SGs under stress and co-located with TIA-1 protein through its SN domain. However, the aggregation of Tudor-SN protein to SGs lagged behind that of TIA-1.2.Tudor-N protein involved in P-bodies aggregation under stress and co-located with Ago2 protein and Dcp1 protein respectively. Low expression of Tudor-SN protein does not prevent SG aggregation. However, it will affect the density and size of SGs. 4.Tudor-SN protein is dependent on tubulin (Microtubules)-伪-Tubulin. in the process of SGs formation. Conclusion: as a kind of RNA binding protein, Tudor-SN protein can not only participate in the aggregation of SGs, but also participate in the aggregation of P-bodies. It is a newly discovered component of RNA granule sharing protein. In response to stress, SGs marker protein TIA-1 and P-bodies marker protein Dcp1 produced intracellular localization. However, it is not the promoter component of SGs aggregation. The process of aggregation to SGs under stress depends on the support and guidance of tubulin 伪-Tubulin.
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘宁;;“RNA干扰”的功能调控机制[J];国外医学情报;2004年02期

2 袁成福;;RNA干扰及其实验方法[J];湖北民族学院学报(医学版);2005年04期

3 ;第四届全国RNA学术研讨会讯息[J];国际医药卫生导报;2005年02期

4 纪虹;孙开来;;小RNA的研究现状[J];国际遗传学杂志;2006年01期

5 陈柳青;曾学思;孙建方;;石蜡包埋皮肤组织标本中提取RNA进行逆转录PCR的研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2006年01期

6 ;重组RNA的表达——tRNA支架的巧妙运用[J];生物医学工程研究;2007年03期

7 张义玲;魏旭斌;蔡荣;钱程;;抑制RNA沉默现象的机理及其在生物医学领域内的应用[J];生物化学与生物物理进展;2007年12期

8 赵轶卓;孙妙囡;孙德军;;牛胰脏RNA Ⅱ的制备[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期

9 万春鹏;周寿然;左爱仁;;RNA干扰机制及其应用研究进展[J];现代生物医学进展;2008年02期

10 刘新玉;;氟喹诺酮类抗生素可增强RNA干扰的效果[J];中国医药生物技术;2008年04期

相关会议论文 前10条

1 王蕾;王秦虎;单卫星;;大豆疫霉菌小RNA通路核心组件的识别分析及突变体筛选[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年

2 蒋锋;王传跃;陈晓岗;;RNA干扰技术及其应用[A];中国神经科学学会精神神经专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文集[C];2004年

3 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

4 宋尔卫;;RNA干扰疗法的开发应用:靶点选择和靶向导入[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

5 ;RNA-interference-based functional research on rat epididymis-specific gene 16 and human paternally expressed gene PEG10 and the therapeutic applications of RNA interference in HBV,SARS,liver cancer,liver fibrosis and keloid fibroblast[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

6 郭晓红;周忠孝;吴明煜;;RNA干涉的分子机制及技术研究进展[A];中国生理学会论文汇编2005年第一期[C];2005年

7 李涛;李前忠;;Prediction of RNA binding sites in proteins from sequence[A];第四届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2010年

8 Jian-Hua Yang;Liang-Hu Qu;;ChIPBase:decoding transcriptional regulation of long non-coding RNA and microRNA genes from ChIP-Seq data[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

9 戚益军;;植物小RNA和长非编码RNA[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

10 陈润生;;非编码RNA和RNA组学[A];第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2012年

相关重要报纸文章 前10条

1 麦迪信;小分子RNA可能有大作用[N];医药经济报;2003年

2 董映璧;美发现基因调控可回应“RNA世界”[N];科技日报;2006年

3 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年

4 记者 冯卫东;研究人员发现可破坏肿瘤抑制基因的小RNA[N];科技日报;2009年

5 聂翠蓉;RNA：纵是配角也精彩[N];科技日报;2009年

6 冯卫东;RNA干扰机制首次在人体中获得证实[N];科技日报;2010年

7 冯卫东　王小龙;英在地球早期环境模拟条件下合成类RNA[N];科技日报;2009年

8 记者 常丽君;新技术让研究进入单细胞内RNA的世界[N];科技日报;2011年

9 记者 储笑抒 通讯员 盛伟;人体微小RNA有望提前发出癌症预警[N];南京日报;2011年

10 记者 刘传书;新技术揭示人转录组中存在大量RNA编辑[N];科技日报;2012年

相关博士学位论文 前10条

1 邬开朗;RNA干扰在抑制病毒基因表达与复制中的作用研究[D];武汉大学;2005年

2 王立坤;RNA-seq数据的处理与应用[D];吉林大学;2012年

3 高爱保;重金属诱导长江华溪蟹RNA差异显示及定量分析[D];山西大学;2011年

4 沈梅;RNA沉默抑制子的生化和结构研究[D];北京协和医学院;2009年

5 陈祖玉;水稻内源非编码小RNA的多样性[D];武汉大学;2005年

6 刘振栋;包含假结的RNA结构预测算法研究[D];山东大学;2014年

7 李振亚;人肝脏特异性表达的小RNA-miR-122表达调控机制与功能的研究[D];中国协和医科大学;2010年

8 吕欣;嵌合型重组HCV cDNA的构建及体外转录RNA的感染特性研究[D];第四军医大学;2005年

9 赵阳洋;对具有复杂结构的伪扭结RNA的组合分析[D];南开大学;2012年

10 林美娟;茶尺蠖小RNA病毒RNA依赖的RNA聚合酶功能研究及全长cDNA克隆构建[D];武汉大学;2009年

相关硕士学位论文 前10条

1 孙晓娜;针对HIV-1 vpr基因的RNA干扰作用研究[D];北京工业大学;2010年

2 樊梅娜;几种RNA沉默抑制蛋白的表达纯化及沉默抑制特性分析[D];山东农业大学;2012年

3 侯继业;RNA干扰技术用于流感病毒防治的探索研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

4 林园园;乙型肝炎病毒RNA上La protein结合位点的缺失对其自身稳定性影响的实验研究[D];华中科技大学;2006年

5 周芳;家蚕细胞中RISC复合物结合小RNA的分离、鉴定与分析[D];浙江理工大学;2013年

6 黄守均;鸡的小RNA文库构建和非编码RNA的规模筛选[D];中国协和医科大学;2008年

7 陈志强;二甲亚砜通过作用于靶标RNA聚合酶提高转录活性[D];武汉大学;2005年

8 苏杨;LMW RNA分离方法改进及与人类胚胎发育相关miRNA的克隆表达[D];暨南大学;2007年

9 丁月芹;五种鼠基因组中4.5S RNA基因拷贝数的鉴定与分析[D];曲阜师范大学;2011年

10 刘中成;枣总RNA提取及mRNA差异显示技术体系的建立[D];河北农业大学;2005年

，

本文编号：2380924