单纯疱疹Ⅱ型microRNA-H3真核过表达载体的构建及对Hela细胞活性的影响

发布时间：2019-01-09 10:49

【摘要】：目的人宫颈癌细胞(Hela)中表达Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)编码的microRNA-H3(miR-H3),检测该mRNA对Hela细胞活性的影响。方法 PCR扩增microRNA-H3的前体序列,将其插入到pmRmcherry(cherry)载体中,并酶切测序同时验证;重组质粒转染Hela细胞,q PCR检测microRNA的相对表达水平,转染受体细胞,并用放线菌素D(Act D)诱导凋亡,MTT法、流式细胞术和Edu染色共同检测Hela细胞活性。结果双酶切、测序表明cherry/miR-H3重组质粒构建成功,q PCR检测miR-H3大量表达,MTT法、Edu染色和流式细胞术检测表明转染重组质粒cherry/miR-H3并经诱导凋亡组细胞的活性明显比空质粒转染组和未转染组细胞活性高,具有统计学意义,而与正常细胞对照组无显著差异。结论 cherry/miR-H3真核表达载体可在Hela细胞中高效表达,并具有抗Act D诱导的细胞凋亡作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of herpes simplex virus (HSV-2) latent associated transcripts (miR-H3) encoding microRNA-H3 (miR-H3) on the activity of human cervical cancer cell line (Hela). Methods the precursor sequence of microRNA-H3 was amplified by PCR and inserted into pmRmcherry (cherry) vector. The relative expression of microRNA was detected by, q PCR in Hela cells transfected with recombinant plasmid, and the apoptosis was induced by actinomycin D (Act D). The activity of Hela cells was detected by MTT, flow cytometry and Edu staining. Results double enzyme digestion and sequencing showed that the recombinant plasmid of cherry/miR-H3 was successfully constructed to detect the large amount of miR-H3 expression, and the MTT method was used to detect the expression of miR-H3. Edu staining and flow cytometry analysis showed that the activity of the cells transfected with recombinant plasmid cherry/miR-H3 and induced apoptosis was significantly higher than that of the empty plasmid transfection group and the untransfected group, and the cell activity was significantly higher than that of the blank plasmid transfection group and the untransfected group. There was no significant difference between the control group and the control group. Conclusion cherry/miR-H3 eukaryotic expression vector can be highly expressed in Hela cells and can inhibit apoptosis induced by Act D.
【作者单位】： 华南理工大学生物科学与工程学院;广州军区广州总医院皮肤科;
【基金】：国家自然科学基金资助(编号81171511)靶向HSV-2潜伏复发的microRNA的筛选及作用研究(起止年月:(2012.01-2015.12);此研究项目获军队医疗成果二等奖(省部级);证书编号(2013-2-28-1)
【分类号】：R373

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