CD73在动脉粥样硬化进程中的作用及其机制研究

发布时间：2019-01-24 12:57

【摘要】：CD73即胞外-5’-核苷酸酶(ecto-5'-nucleotidase,eN),是由GPI锚定在细胞膜外表面的糖蛋白。其主要功能是水解AMP生成重要的生理活性物质腺苷。胞外腺苷通过作用于靶细胞膜上4种G蛋白偶联的腺苷受体(A1R、A2aR、A2bR、A3R),发挥抑制炎症、扩张血管、提高内皮屏障功能、刺激血管新生、抑制血小板聚集、减少自由基产生等作用。近年还有研究发现,CD73参与了脂肪细胞中的脂滴形成过程,而血脂水平增高是动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)的重要危险因素,这提示CD73在动脉粥样硬化的发生、发展过程中可能发挥着重要作用,但是如何发挥作用及其作用机制目前国内外尚无报导。本课题首先利用CD73-/-敲基因小鼠和ApoE-/-敲基因小鼠进行杂交,培育出CD73-/-ApoE-/-双基因敲除小鼠,然后高脂喂养建立动脉粥样硬化模型,整体水平研究CD73对动脉粥样硬化斑块形成的影响,并探讨CD73在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制,从而为动脉粥样硬化的防治提供新的靶点及途径。 本研究主要分为三部分： 第一部分培育出CD73-/-ApoE-/-双基因敲除小鼠。利用CD73-/-小鼠与相同遗传背景ApoE-/-小鼠杂交,产生的F1代小鼠与ApoE-/-小鼠回交,在其F2代中筛选出基因型为CD73+/-ApoE-/-的小鼠,再进行互交,从F3代中筛选出CD73-/-ApoE-/-后代。运用PCR方法对小鼠的基因型进行鉴定。根据PCR产物凝胶电泳的结果,能同时扩增出280bp和245bp片段的小鼠为成功培育的CD73-/-ApoE-/-小鼠。 第二部分选择CD73-/-、CD73+/+、CD73-/-ApoE-/-及ApoE-/-四组4周龄小鼠予以高脂饲料喂养8周,同样分组的小鼠予以高脂饲料喂养16周,构建动脉粥样硬化模型,检测各组小鼠的体重、血脂水平,观察主动脉血管斑块形成情况。实验结果显示,CD73-/-与CD73+/+小鼠体重、血脂水平无统计学差异,而CD73-/-ApoE-/-小鼠体重明显低于ApoE-/-小鼠,且CD73-/-ApoE-/-小鼠的血浆甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白也明显低于ApoE-/-小鼠,但高密度脂蛋白和脂蛋白(a)无明显统计学差异。选取左锁骨下动脉下2mm开始至髂动脉分支处血管进行苏丹Ⅳ染色,发现高脂喂养16周后,CD73-/-ApoE-/-小鼠斑块总面积占血管总面积的比例明显低于ApoE-/-小鼠。以上结果提示,CD73在动脉粥样硬化的发生、发展中有升高血脂水平,促进斑块形成的作用。 第三部分研究CD73影响脂质代谢的潜在机制。提取ApoE-/-CD73-/-、ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的肝脏总RNA,运用realtime-PCR法检测以下11个参与脂质代谢的关键酶及基因水平：FAS、LCAT、HL、ABCA1、SRBI、GPAT、HSL、PPARα、PPARγ、CYP7A1、FDPS。其中, ApoE-/-CD73-/-小鼠的LCAT和CYP7A1mRNA表达水平明显高于ApoE-/-小鼠,HL、PPARα、PPARγ、FDPS的(?)nRNA表达水平明显低于ApoE-/-小鼠,其余基因]nRNA表达无明显统计学差异。 基于以上研究,我们得出以下结论：1.CD73与动脉粥样硬化形成有关,可促进斑块形成,并且与脂质代谢关系尤为密切。2.CD73促进体内血脂水平的增高,主要升高血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平,对高密度脂蛋白和脂蛋白(a)无明显影响。3.CD73可以通过影响动脉粥样硬化小鼠的LCAT、HL、PPARα、PPARγ、CYP7A1、FDPS基因的表达而发挥调节血脂代谢、促进斑块形成的作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363

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本文编号：2414496